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ELISA试剂盒清洗是关键

阅读:359发布时间:2014-1-13

 

关于ELISA试剂盒实验相信各位老师都不陌生,ELISA试剂盒实验一般包含两个或以上的孵育步骤,中间以洗涤隔开。ELISA通常在96孔板中开展,其上包被了结合抗原或抗体。在封闭步骤后,包被后的平板首先与一抗或抗原孵育。随后通过一些洗涤步骤去除未结合(低亲和力)的抗原-抗体复合物。接着,平板与二抗孵育。这种带有酶的抗体与高亲和力的抗原-抗体复合物结合。之后,又是一轮洗涤。zui后是添加底物并检测信号。下面就让上海科兴商贸有限公司为您讲解关于洗涤的具体操作。
洗涤参数:
一些参数会影响洗涤步骤的效果。*个主要的参数是洗涤量。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景,那么不要犹豫,将洗涤量调为高,是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到,从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。ELISA板的制造商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被量。行业中通常使用的包被量是200 µl。如果你的试剂盒也是这样,那么制造商可能会建议使用300 µl洗涤液进行洗涤,以便清洁整个反应孔的壁。一般来说,洗涤量越高,则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。
洗涤次数:
第二个影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然,洗涤次数越多,背景越低。然而,太多次的洗涤会降低信号强度,使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过,ELISA板的制造商会对洗涤次数提出建议。一般而言,制造商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板,必须优化洗涤次数。
ELISA实验虽然看起来有点简单,但是这并不能成为我们掉以轻心的借口,实验过程中应该仔细检查洗涤步骤,保证实验的结果。

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