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阅读:373发布时间:2015-12-28
gelred一种高灵敏、低毒性和超稳定于一身的的荧光核酸凝胶染色试剂。具有广泛适应性和染色过程简单等特点。下面简单介绍gelred使用方法
1.胶染法(用法同EB)
(1)制胶时加入GelRed 核酸染料(例如:每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000× 储液,以此比例类推)。
(2)按照常规方法进行电泳。
注意事项:
此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块50mL的胶。
由于GelRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备,并长期保存直到使用。
此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
2.泡染法
(1)按照常规方法进行电泳。
(2)用H2O将GelRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如将15μL GelRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
(3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,zui*染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。
注意事项:
1. 用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
2. 3× GelRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。
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