一、Insulin牛胰岛素试剂盒准备试剂与收集血样
1、收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。所有标本测定前用标本稀释液作1：20稀释（取10ul，加标本稀释液190ul,稀释20倍）。
2、标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，*管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在*管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
3、10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
4、洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
二、Insulin牛胰岛素试剂盒检测程序
1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3.每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。
8.每孔加入100ul终止液混匀。
9.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
三、Insulin牛胰岛素结果计算与判断
1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2.以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应Insulin含量，再乘上稀释倍数即可。
