男女呻吟久久免费视频 人 干扰素 （ IFN- γ ） 试剂盒说明书

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人 γ干扰素 (IFN- γ ) 酶联免疫 分析（ ELISA ）
试剂 盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关
液体样本 中 γ 干扰素 ( IFN- γ ) 的 含量。
实验原理 ：
本试剂盒应用 双抗体 夹心法测定 标本 中 人 γ 干扰素 ( IFN- γ ) 水平。用纯化的 人 γ 干扰素
( IFN- γ ) 抗体 包被微孔板，制成固相 抗 体，往包被 单抗 的微孔中依次加入 γ 干扰素 ( IFN- γ ) ，
再与 HRP 标记的 IFN- γ 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底
物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。
颜色的深浅和样品中的 γ 干扰素 ( IFN- γ ) 呈正相关 。 用酶标仪 在 450 n m 波长下测定吸光度 （ O D
值 ） ， 通过标准曲线 计算样品 中 人 γ 干扰素 ( IFN- γ ) 浓度 。
试剂盒组成 ：
试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存
说明书 1 份 1 份
封板膜 2 片（ 48 ） 2 片（ 96 ）
密封袋 1 个 1 个
酶标包被板 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ 保存
标准品： 1350pg/ml 0.5ml × 1 瓶 0.5ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
标准品稀释液 1.5ml × 1 瓶 1.5ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
酶标试剂 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
样品稀释液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
显色剂 A 液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
显色剂 B 液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
终止液 3ml × 1 瓶 6ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
浓缩洗涤液 （ 20ml × 20 倍） × 1 瓶 （ 20ml × 30 倍） × 1 瓶 2-8 ℃ 保存
样本处理及要求 ：
1. 血清 ： 室温血液自然凝固 10-20 分钟 ， 离心 20 分钟左右 （ 2000-3000 转 / 分 ） 。 仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离 心
20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清 ： 检测分泌性的成份时 ， 用无菌管收集 。 离心 20 分钟左右 （ 2000-3000 转 /
分 ） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到 100 万 /ml 左右 。 通过反复冻融 ， 以使细胞破坏并放出细胞内成份 。 离心 20 分
钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。2
5. 组织标本 ： 切割标本后 ， 称取重量 。 加入一定量的 PBS ， PH7.4 。 用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃ 的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ） ，用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应 避免反复冻融 .
7. 不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标
准品 100 μ l ， 然后在* 、 第二孔中加标准品稀释液 50 μ l ， 混匀 ； 然后从*孔 、 第二
孔中各取 100 μ l 分别加到第三孔和第四孔 ， 再在第三 、 第四孔分别加标准品稀释液 50 μ l ，
混匀 ； 然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l 弃掉 ， 再各取 50 μ l 分别加到第五 、 第六孔
中 ， 再在第五 、 第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ， 混匀 ； 混匀后从第五 、 第六孔中各
取 50 μ l 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 μ l ，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50 μ l 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液 50 μ l ，混匀后从第九第十孔中各取 50 μ l 弃掉 。 （稀释后各孔加样量都为 50 μ l ，
浓度分别为 900 pg/ml ， 600 pg/ml ， 300 pg/ml ， 150 pg/ml ， 75 pg/ml ） 。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同 ） 、 待测样
品孔 。 在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40 μ l ， 然后再加待测样品 10 μ l （ 样
品zui终稀释度为 5 倍 ） 。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混
匀 。
3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃ 温育 3 0 分钟 。
4. 配液 ： 将 30 （ 48T 的 20 倍 ） 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 （ 48T 的 20 倍 ） 倍稀释后备用 。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外 。
7. 温育：操作同 3 。
8. 洗涤：操作同 5 。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μ l ，再加入显色剂 B50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显 色
15 分钟 .
10. 终止：每孔加终止 液 50 μ l ，终止反应 （此时蓝色立转黄色 ） 。
11. 测定 ： 以空白空调零 ， 4 50 nm 波长依序测量各孔的 吸光 度 （ OD 值 ） 。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
注意事项：
1 ． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2 ． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。
3 ． 各步加样均应使用加样器 ， 并经常校对其准确性 ， 以避免试验误差 。 一次加样时间
控制在 5 分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4 ． 请每次测定的同时做标准曲线 ， 做复孔 。 如标本中待测物质含量过高 （ 样本 OD 值
大于标准品孔*孔的 OD 值 ） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定 ， 计
算时请zui后 乘以 总稀释倍数（ × n × 5 ） 。
5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6 ． 底物请避光保存。3
7 ． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .
8 ． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9 ． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算 ：
以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以 稀释
倍数 ；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以 稀释
倍数 ，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.92 以上。
2. 批内与批间应分别小于 9% 和 15%
检测范围：
30 pg/ml -1000 pg/ml
保存条件及有效期：
1. 试剂盒保存： 2-8 ℃ 。
2 ．有效期： 6 个月