酶切可以：（1）获得粘性末端进行连接；（2）用于验证DNA重组是否成功；（3）用于验证质粒酶切位点是否有效。
实验方法
酶切
实验方法原理     采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单，但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同（主要是盐离子浓度不同）或反应温度不同，这时可以采用如下措施解决：1）先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切；2）*行低盐要求的酶酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切；3）使用通用缓冲液进行双酶切。具体要根据酶的反应要求进行，尽量避免星号活力。
实验材料    质粒DNA
试剂、试剂盒    限制性核酸内切酶蒸馏水
仪器、耗材    微量移液枪离心机电泳仪水浴锅紫外透射观测仪离心管记号笔
实验步骤    
一、实验材料准备 
 
1.  材料：质粒DNA。
 
2.  试剂：限制性内切酶、ddH2O。
 
3 .  仪器：微量移液枪，离心机，水浴锅， 电泳仪，紫外透射观测仪。
 
二、单酶切 

1.  在1.5 mL灭菌离心管中依次加入：

（1）质粒DNA：X μL（约1 μg）。

（2）限制性内切酶：1 μL（约10 U）。

（3）10×buffer：2 μL。

（4）ddH2O：补足20 μL。

2.  混匀，做好标记。

3.  37℃水浴1-3 h。

4.  70℃水浴10 min中止反应。

5.  电泳检测酶切效果。

三、双酶切 

1.  在1.5 mL灭菌离心管中依次加入：

（1）质粒DNA：X μL（约1 μg）。

（2）限制性内切酶1：1 μL（约10 U）。

（3）限制性内切酶2：1 μL（约10 U）

（3）10×buffer：1或2 μL。

（4）ddH2O：补足20 μL。

2.  混匀，做好标记。

3.  37℃水浴1-3 h。

4.  70℃水浴10 min中止反应。

5.  电泳检测酶切效果。

四、结果与分析 

假若一种酶在环状质粒DNA中只有一个酶切位点， 且酶切*，紫外灯下检测电泳结果，则单酶切应为一条带， 而双酶切则为两条带。如果条带数目多于理论值，那么有可能是酶切不*。如果酶切结果与酶切前的质粒条带一样（超螺旋、线性和开环三条带），则说明质粒*没有被切开。
收起 
注意事项    
1. 酶切的选择原则一般是尽量扩大酶切体系，这样抑制因素得以稀释；基因组DNA或质粒DNA酶的用量较一般DNA大，一般为1μg/10U；所加酶的体积不能超过酶切总体积的1/10，否则甘油浓度会超过5%，会产生星号活力；对难切的质粒或基因组DNA应延长反应时间4―5hr， 甚至。灭活限制性内切酶活性可以采用加热灭活，乙醇沉淀，酚/氯仿抽提，添加EDTA或SDS等方法，具体每一种酶可能有些方法不能*灭活，这一点需要注意。

2.  双酶切体系缓冲液添加量要根据两种限制性内切酶*缓冲体系，可以登录限制性内切酶购买公司查看。