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牛免疫球蛋白A(IGA)ELISA试剂盒的操作步骤

时间:2022-5-11阅读:834
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牛免疫球蛋白A(IGA)ELISA试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体样本中牛免疫球蛋白A(IgA)含量。


实验原理

是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),往预先包被牛免疫球蛋白A(IGA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤,用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的,颜色的深浅和样品中的牛免疫球蛋白A(IGA)呈正相关,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品免疫球蛋白A(IGA)的浓度。


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牛免疫球蛋白A(IGA)ELISA试剂盒操作步骤:

1.取出试剂盒,室温(20-25℃)放置30分钟。


2.分组:取出96孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理,分别设标准品组(6个浓度)、空白孔、待测样品组。

注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。


3.加样:依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中,空白对照孔加入50ul的蒸馏水,其余微孔中加入50ul的待测样本。


4.加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入100ul的酶标溶液(空白对照孔除外)。


5.温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。


6.洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置15-30s,充分清洗酶标板5次,用吸水纸*拍干。


7.显色:各孔加入显色剂A液50ul后,再加入显色剂B液50ul。


8.终止:25-37℃下避光反应10-15分钟,加入50ul终止液。


9.读板:在450nm波长读取各孔的OD值。


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