鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理  

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡免疫球蛋白Y(IgY)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白Y(IgY)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白Y(IgY)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡免疫球蛋白Y(IgY)浓度。

鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒组成

130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（40μg/ml）0.5ml×1瓶

3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

20μg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

10μg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

5μg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

2.5μg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

1.25μg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。