鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤
鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤
本试剂盒仅供研究使用。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡免疫球蛋白Y(IgY)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白Y(IgY),再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白Y(IgY)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡免疫球蛋白Y(IgY)浓度。
鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(40μg/ml)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
鸡免疫球蛋白Y(IgY)酶联免疫分析试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
20μg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
10μg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
5μg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
2.5μg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.25μg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转)。
11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
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