一、细胞复苏

将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM*培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。

二、细胞传代

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。放人细胞培养箱3min。转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。

冻存液的配制：70%的*培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

1.进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：

2.确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

3.确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

4.操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

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