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介绍细胞冻存具体过程

时间:2022-9-29阅读:798
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1、预先配制冻存液:

冻存液比例多种,根据细胞的特性进行调整冻存液的比例:

5%—10%DMSO + 20%—90%血清 + 0%—70%基础培养液;

2、取对数生长期的细胞,去除旧培养液,用PBS清洗1-2次;去掉培养瓶里的残余血清;

3、细胞消化0.5-2min(具体时间根据镜下形态判断),显微镜下观察细胞,细胞胞质回缩,细胞间不再连接成片,此时加入*培养基终止消化;

4、用巴氏吸管轻轻吹打细胞,形成细胞悬液,将细胞悬液1000r/min左右条件下离心3-5min;

5、弃上清,加入适量预先配制好的冻存液,巴氏吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中的细胞密度为5×106/ml~1×107/ml;

6、将细胞分装入冻存管中,每管1-1.5ml;

7、冻存管标记细胞名称,冻存时间,操作者及细胞代数信息。对于悬浮细胞冻存,则直接收集离心细胞,其他步骤相同。


注意事项:

1、需冻存保种的细胞应在生长良好且存活率高,其密度约为80-90%的状态。细胞冻存前应保证细胞的活力好,无污染。

2、在细胞冻存过程中,所结的冰晶对细胞伤害较大,所以过程一定要慢。冻存或者复苏用新配制的


上海纪宁实业有限公司位于中国*大城市——中华人民共和国直辖市之一的上海,已发展成集科研、生产、销售为一体的创新性企业。公司专注于生物、生化领域产品销售,主要经营的有ELISA试剂盒、生化试剂、抗体、标准品、对照品、细胞、血清、培养基等生化产品。


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