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人血清白蛋白​HSA的检测试剂及定量检测方法

时间:2022-11-1阅读:659
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人血清白蛋白的检测试剂

背景技术

HSA是一种小分子量、非糖基化、带负电荷的 血清蛋白,具有物质结合、运输、抗氧化以及酶活性等多种功能。生理情况下,白蛋白是 细胞外液中含量多的蛋白质,其中血浆白蛋白含量为35~50g/L,约占血浆总蛋白的60%, 远高于组织间液中的蛋白含量。白蛋白主要在肝脏合成,但不在肝脏内贮存,由肝细胞直接 分泌到窦状隙中进入血液循环,半衰期为17~19d,终由肌肉、肝脏和肾脏等降解。


HSA具有协调维持血管内皮完整性,抗氧化作用,脏器功能保护,维持胶体渗透压, HSA还有保护血细胞、调节凝血、作为氮源为损伤组织修复提供营养等作用。因此,开发检测 迅速,操作简单,成本低廉的HSA检测方法具有重要意义。


本发明提供了一种定量测定生物样品中白蛋白含量的方法及应用,具体为HCAB可 与白蛋白特异性结合,抑制了扭曲分子内电荷转移现象,非辐射跃迀减少,从而恢复荧光, 实现白蛋白的定量检测。在生理pH值条件下被激发后(激发波长λ Μ= 424 nm)产生稳定的 荧光信号(发射波长λ_= 560 nm)。其荧光值强度与白蛋白的浓度成正比,根据检测到的荧 光值可推算出生物样品中白蛋白的含量。该方法可用于测定血浆、尿液等多种生物样品中 白蛋白的绝对含量,同时还具有灵敏度高、准确度高、、易于高通量检测 的优势,并且操作简单,成本低廉。


具体实施方式

下面的实施例将对本发明予以进一步的说明,但并不因此而限制本发明。

探针1的合成: 1 · 3mmol的化合物3 (2 ' -羟基苯乙酮)、1 · 2mmol的化合物4溶解在 30mL乙醇中,再向其中滴加4.9mmol氢氧化钾溶液。搅拌8 h,旋蒸除去溶剂,将剩余固体纯 化(硅胶、乙酸乙酯-正己烷作为洗脱剂,1: 5,v/v),得到红色固体160mg,为探针1,产率为 50%。探针 1 的 1HNMR (400 MHz,CDC13): δ 13.19 (s,1H),7.91 (d,J = 7.0 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.37-7.49 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85-6.96 (m, 1H), 6.69 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.05 (s, 6H)。


探针HCAB的合成: 将0 · 5mmol的探针1和0 · 5mmol的三乙胺加入到10mL的四氢呋喃中,再将苯甲酰氯(0.6 mmol,混合5mL四氢呋喃)在30分钟内逐滴加入反应混合物中,在0°C下搅拌lh,然后升温至 室温搅拌过夜。旋蒸除去溶剂,剩余固体纯化(硅胶、乙酸乙酯-正己烷作为洗脱剂,l:3,v/ v),得到103 mg的固体,为探针HCAB,产率为55%。探针HCAB的1H NMR (400 MHz, CDC13): δ 8.13 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.54 (m, 3H), 7.35 (m, 6H), 6.94 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.58-6.60 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.01 (s, 6H); 13CNMR (100 MHz, CDCI3): 191.84, 165.02, 152.06, 148.63, 146.91, 133.51, 133.42, 131.65, 130.42, 130.31, 129.80, 129.29, 128.49, 125.95, 123.40, 122.25, 120.71, 111.71, 40.99; HRMS: m/z calcd for C24H21NO3: 371.1521 and found 371.1522。


探针2的合成: 将0.5mmol的探针1和0.5mmol的三乙胺加入到10mL的四氢呋喃中,再将乙酰氯(0.6 mmol,混合5mL四氢呋喃)在30分钟内逐滴加入反应混合物中,在0°C下搅拌lh,然后升温至 室温搅拌过夜。旋蒸除去溶剂,剩余固体纯化(硅胶、乙酸乙酯-正己烷作为洗脱剂,1:3,v/ v),得到82mg的固体为探针2,产率为53%。探针2的1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42-7.56 (m,4H), 7.32 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.03 (s, 6H), 2.22 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCh): 191.85,169.44, 152.15, 148.48, 146.74, 133.16, 130.45, 131.73, 129.74, 125.93, 123.33, 122.20, 120.39, 111.83, 40.10, 21.01. HRMS: m/z calcd for C19H19NO3: 309.1365 and found 309.1372。

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