人血清白蛋白的检测试剂

背景技术

HSA是一种小分子量、非糖基化、带负电荷的 血清蛋白，具有物质结合、运输、抗氧化以及酶活性等多种功能。生理情况下，白蛋白是 细胞外液中含量多的蛋白质，其中血浆白蛋白含量为35~50g/L，约占血浆总蛋白的60%， 远高于组织间液中的蛋白含量。白蛋白主要在肝脏合成，但不在肝脏内贮存，由肝细胞直接 分泌到窦状隙中进入血液循环，半衰期为17~19d，终由肌肉、肝脏和肾脏等降解。

HSA具有协调维持血管内皮完整性，抗氧化作用，脏器功能保护，维持胶体渗透压， HSA还有保护血细胞、调节凝血、作为氮源为损伤组织修复提供营养等作用。因此，开发检测 迅速，操作简单，成本低廉的HSA检测方法具有重要意义。

本发明提供了一种定量测定生物样品中白蛋白含量的方法及应用，具体为HCAB可 与白蛋白特异性结合，抑制了扭曲分子内电荷转移现象，非辐射跃迀减少，从而恢复荧光， 实现白蛋白的定量检测。在生理pH值条件下被激发后(激发波长λ Μ= 424 nm)产生稳定的 荧光信号(发射波长λ_= 560 nm)。其荧光值强度与白蛋白的浓度成正比，根据检测到的荧 光值可推算出生物样品中白蛋白的含量。该方法可用于测定血浆、尿液等多种生物样品中 白蛋白的绝对含量，同时还具有灵敏度高、准确度高、、易于高通量检测 的优势，并且操作简单，成本低廉。

具体实施方式

下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。

探针1的合成： 1 · 3mmol的化合物3 (2 ' -羟基苯乙酮）、1 · 2mmol的化合物4溶解在 30mL乙醇中，再向其中滴加4.9mmol氢氧化钾溶液。搅拌8 h，旋蒸除去溶剂，将剩余固体纯 化(硅胶、乙酸乙酯-正己烷作为洗脱剂，1: 5，v/v)，得到红色固体160mg，为探针1，产率为 50%。探针 1 的 1HNMR (400 MHz,CDC13): δ 13.19 (s，1H)，7.91 (d，J = 7.0 Hz, 2H), 7.57 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.37-7.49 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.85-6.96 (m, 1H), 6.69 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.05 (s, 6H)。

探针HCAB的合成： 将0 · 5mmol的探针1和0 · 5mmol的三乙胺加入到10mL的四氢呋喃中，再将苯甲酰氯(0.6 mmol，混合5mL四氢呋喃)在30分钟内逐滴加入反应混合物中，在0°C下搅拌lh，然后升温至 室温搅拌过夜。旋蒸除去溶剂，剩余固体纯化(硅胶、乙酸乙酯-正己烷作为洗脱剂，l:3，v/ v)，得到103 mg的固体，为探针HCAB，产率为55%。探针HCAB的1H NMR (400 MHz, CDC13)： δ 8.13 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.54 (m, 3H), 7.35 (m, 6H), 6.94 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.58-6.60 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 3.01 (s, 6H); 13CNMR (100 MHz, CDCI3): 191.84， 165.02， 152.06， 148.63， 146.91， 133.51, 133.42, 131.65, 130.42, 130.31, 129.80, 129.29, 128.49, 125.95, 123.40, 122.25, 120.71, 111.71, 40.99; HRMS: m/z calcd for C24H21NO3： 371.1521 and found 371.1522。

探针2的合成： 将0.5mmol的探针1和0.5mmol的三乙胺加入到10mL的四氢呋喃中，再将乙酰氯（0.6 mmol，混合5mL四氢呋喃)在30分钟内逐滴加入反应混合物中，在0°C下搅拌lh，然后升温至 室温搅拌过夜。旋蒸除去溶剂，剩余固体纯化(硅胶、乙酸乙酯-正己烷作为洗脱剂，1:3，v/ v)，得到82mg的固体为探针2,产率为53%。探针2的1H NMR (400 MHz, CDCI3): δ 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42-7.56 (m,4H), 7.32 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.03 (s, 6H), 2.22 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCh): 191.85，169.44， 152.15, 148.48, 146.74, 133.16, 130.45, 131.73, 129.74, 125.93, 123.33, 122.20, 120.39, 111.83, 40.10, 21.01. HRMS: m/z calcd for C19H19NO3： 309.1365 and found 309.1372。