做料研实验需要耐心和细心,一个不小心,实验结果就会出现很大的偏差， 上周有朋友们向我们咨询暴浮细胞培养的正确方法，上海纪宁生物技术员为大家整理了悬浮细胞培养的步骤, 一起来学习下吧。

一.材料与仪器

1.冻存HeLa S3细胞

70%乙醇MEM-10/ EDTA

旋转瓶培养基5 25 cm2组织培养瓶C02培养箱Sorvall H-6000A转子100 ml或200 ml通气旋转瓶和带滤膜的瓶盖.

二、步骤

1.将含有冻存HeLa S3细胞的安瓿放入379C水浴中解冻。

2.用70%乙醇对安瓿的顶端进行消毒,打开安瓿,用吸管将细胞转移到含有5 ml MEM-10 培养基的25 cm2组织培养瓶中,轻轻摇动培养瓶,使细胞均匀分布于培养瓶中,放入5% CO2加湿培养箱中37°C培养过夜。

3.将培养基吸出,用0.5 ml 37%C的/EDTA覆盖细胞,消化30~40 s。

4.加入10 ml旋转瓶培养基.5 ,并将细胞转移至50 ml的离心管中。室温1800g离心5min,弃上清。

5.将细胞沉淀悬浮在5 ml的旋转瓶培养基5中，上下吹打,将细胞团打散。

6.在100 ml或200 ml通气旋转瓶中加入50 ml旋转瓶培养基-5 ,并将细胞悬液转移到瓶中。

7.取出1 ml细胞悬液,用血细胞计数器(附录3F)进行细胞计数。加入适量的旋转瓶培养基5 ,使细胞密度为(3~4) x 105细胞/ml。将细胞放入无CO2培养箱, 37°C旋转培养。

8.随后的两天让细胞继续生长,并且每天对细胞进行计数,加入适量的旋转瓶培养基-5以维持( 3~4) x105细胞/ml的细胞密度。

9.取1 ml的细胞悬液,用血细胞计数器对细胞进行监测。

10.当细胞密度达到(4~5) x105细胞/ml时,隔天或每天用培养基将细胞稀释至1.5x105或2.5x105细胞/ml.

11.分别将装有50 ml或100 ml细胞悬液的100 ml或200 ml通气旋转瓶放入37°C无CO2培养箱旋转培养。每天或隔天传代。

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以上是浅谈悬浮细胞培养的正确方法，你知道了吗？