1. 加样一般运用加液器，在ELISA试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加中止液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴，以免穿插污染。加酶结合物、底物和中止液时则不需更换吸嘴。

2. 在成批手工检测中，还应留心操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不留心可能会导致错误成果或定量禁绝。

3. 跟着病情的进展或由其他因素影响，某些抗体在机体内的含量发生大幅动摇，因此有必要对标本进行预处理。直接法测定中，标本恰当稀释还可下降非特异性反应。

4. 判定成果须运用ELISA试剂盒测读仪，比色法判读可选择单波长或双波长，依据反应液色彩的不同选用不同波长的滤光片，以空白孔校零测定反应孔的吸光度值。酶标仪具有杰出的重复性。  

5. 洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决定试验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的免疫反应物，中止抗原抗体反应，除掉标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板，前者洗刷质量较好，各反应孔洗刷效果均一，批内、批间差异小，手工洗板应留心控制各孔洗刷效果，差异不宜太大。