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纪宁(上海)科研试剂经销商
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阅读:379发布时间:2015-1-18
关于ELISA试剂盒实验相信各位老师都不陌生,ELISA试剂盒实验一般包含两个或以上的孵育步骤,中间以洗涤隔开。ELISA试剂盒通常在96孔板中开展,其上包被了结合抗原或抗体。
在封闭步骤后,包被后的平板首先与一抗或抗原孵育。随后通过一些洗涤步骤去除未结合(低亲和力)的抗原-抗体复合物。接着,平板与二抗孵育。这种带有酶的抗体与高亲和力的抗原-抗体复合物结合。之后,又是一轮洗涤。
zui后是添加底物并检测信号。是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到,从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。ELISA试剂盒板的制造商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被量。行业中通常使用的包被量是200 μl。如果你的试剂盒也是这样,那么制造商可能会建议使用300 μl洗涤液进行洗涤,以便清洁整个反应孔的壁。
一般来说,洗涤量越高,则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过,一般而言,制造商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被ELISA试剂盒板,必须优化洗涤次数。
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