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阅读:345发布时间:2016-10-14
ELISA检测试剂盒在实验条件(包括试剂)较难保证恒定的情况下,这种判断法较为合适。在得出标本( S)和阴性对照(N)的A 值后,计算S/N 值。也有写作P/N 的,这里的P 不代表阳性(positive),而是病人(pati ent)的缩写,不应误解。为避免混淆,更宜用S/N 表示。在早期的间接法ELISA检测试剂盒中,有些作者定出S/N 为阳性标准,现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的 S/N 的阈值。更应注意的是,N 所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液,以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底低得多。定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出 "有"或"无"的简单回答,分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。
ELISA检测试剂盒在这种半定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的zui高稀释度即为滴度。根据滴度的高低,可以判断标本反应性的强弱,这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。在间接法和夹心法 ELISA检测试剂盒中,阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA 中则相反,阴性孔呈色深于阳性孔。
两类反应的结果判断方法不同,分述于下。在ELISA检测试剂盒中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在ELISA检测试剂盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。
ELISA检测试剂盒有此测定(如间接法ELISA试剂盒)需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其中加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器,在ELISA检测试剂盒中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。
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