在ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶联络物，加底物。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不可溅起，不可发作气泡。加标本一般用微量加样器，按规矩的量参与板孔中。每次加标本应更换吸嘴，防止发作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加样。在ELISA试剂盒中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶物，加底物。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不可溅起，不可发作气泡。加标本一般用微量加样器，按规矩的量参与板孔中。每次加标本应更换吸嘴，防止发作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加样。
在ELISA试剂盒检查中，质量确保是一个杂乱的进程，很多主要的环节都影响到检查的质量。现分述如下：
《一》办法学的影响
ELISA测定模式包含以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞赛抑制法，其间竞赛抑制法因受操作时差所导致的竞赛等要素的影响，成果重复性较差，质量较难操控。
《二》试剂要素
1.试剂的挑选
免疫检查的原理均根据抗原抗体反响。由于该反响进程受多种要素的影响，如普遍存在基质效应、穿插反响等，因而检查成果难以溯源，不一样办法、不一样试剂之间乃至同一试剂不一样批号间成果均缺乏可比性。试剂质量在很大程度上决议了检查的水平，因而在引进新项目之前有必要对试剂进行严厉的评估。试剂的评估有以下几个进程：⑴断定展开该项意图必要性;⑵了解该项目现有的检查办法和原理;⑶在了解试剂的组成基础上挑选多家试剂盒进行比较，判别规范参阅办法或参阅物质，其次为临床的满意度及机构的陈述如各级室间质量评估、CDC陈述等;⑷定期对检查成果进行追寻反响直至终究认可该试剂。
2.试剂的预备
不一样批次的ELISA试剂在制作进程中很难确保质量*一致，即使是经过批批检的项目其检查成果也存在区别，因而有必要挑选和订货长批号的试剂，并确保保留条件。严厉执行这一规范能够防止因试剂批号改动而从头树立质控体系及从头评估试剂的杂乱进程，而且能够确保成果的稳定性;对于效期短、运用率低的试剂，应当小量分装，每次运用则取分装有些即可，防止重复冻融形成试剂的失效。
试剂运用前有必要平衡至室温，否则会影响检查下限。未用完的室内质控品及本次不需运用的试剂应密封并及时放回冰箱保留。
《三》ELISA试剂盒样本要素
标本搅扰要素包含内源性搅扰要素和外源性搅扰要素，前者包含类风湿因子、补体、异嗜性抗体、本身抗体、*等，后者包含标本溶血、标本被细菌污染、标本储存时刻过长、标本凝结不全、冷冻标本的重复冻融等。其间外源性搅扰要素是咱们在检查进程中能够防止也是有必要防止的要素，而防止内源性要素的搅扰则主要经过挑选适宜的试剂盒。在临床中遇到罕见的疑问病例时应当考虑到内源性搅扰要素的存在。以下对外源性搅扰要素进行扼要说明：
1.标本溶血 要注意防止呈现严重溶血。血红蛋白中富含血红素基团，其具有类过氧化物的活性，因而，在以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)为符号酶的ELISA测定中，假如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很简单在温育进程中吸附于固相，然后与后边参加的底物反响显色。
2.标本被细菌污染 标本的收集及血清别离要注意尽量防止细菌污染。细菌菌体中除也许富含内源酶对测定发生非特异性搅扰外，还也许对抗原抗体等蛋白发生分化效果。别的标本在保留中呈现污浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检查。
3.标本储存时刻过长 标本在低温下保留时刻过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会致使本底加深、乃至呈现假阳性成果。一般情况下血清标本可在2～8℃下保留l周，冷冻保留时刻会更长，但对于抗体或抗原含量低的标本而言，则也许会因抗体掉价、抗原分化而呈现假阴性成果。
4.ELISA试剂盒标本凝结不全 血液一般在收集后半小时后开端凝结，18～24h*凝结。假如在血液未凝结时即离心别离血清，则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而形成假阳性成果。为了缩短标本处理时刻，能够在离心前将血液标本置于温箱中温育或许选用带别离胶的*或于*中参加恰当的促凝剂以加快血清的别离。
5.冷冻保留标本防止重复冻融 标本的重复冻畅通领悟因其所发生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子发生损坏效果，使抗体效价下跌然后导致假阴性成果，所以测抗体的血清标本如需保留作屡次检查，宜少量分装冻存。此外，标本在冻存时会因蛋白质局部浓缩，分布不均，因而从头融解的标本有必要混匀，但不要进行剧烈振动，重复倒置即可。
按ELISA试剂盒说明书的央求预备实验中需用的试剂。ELISA试剂盒顶用的蒸馏水或去离子水，包含用于洗刷的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液运用pH计丈量较正。从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后运用。试剂盒中本次实验不需用的有些应及时放回冰箱保留。
