咱们知道，在ELISA中通常有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶物后。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例，参加板孔中的标本，其间的抗原并不是都有均等的和固相抗的机会，只有zui靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。
上海纪宁技术员提到：这是一个逐渐平衡的进程，因而需经分散才能达到反响的终点。在这以后参加的酶符号抗体与固相抗原的也相同如此。这就是为何ELISA反响总是需求必定时刻的温育。
温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体的适宜温度。在树立ELISA办法作反响动力学研讨时，实验标明，两次抗原抗体反响通常在37℃经1-2小时，产品的生成可达高峰。
为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为*，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中放置一晚，以形成zui多的沉积。但因所需时刻太长，在ELISA中通常不予选用。
若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，zui终将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以保证各板的温度都能敏捷平衡。
