（1） 显色
显色是ELISA中的终究一步温育反响，此刻酶催化无色的底物生成有色的产品。反响的温度和时刻仍是影响显色的要素。在必定时刻内，阴性孔可坚持无色，而阳性孔则随时刻的延伸而呈色加强。恰当进步温度有助于加快显色进行。在定量测定中，参加底物后的反响温度和时刻应按规则力求准确。定性测定的显色可在室温进行，时刻通常不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显况恰当缩短或延伸反响时刻，及时判别。
OPD底物显色通常在室外温或37℃反响20-30分钟后即不再加深，再延伸反响时刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反响应避光进行，显色反响结束时参加停止液停止反响。OPD产品用硫酸停止后，显色由橙黄色转向棕黄色。 TMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反响调查成果。但为确保实验成果的安稳性，宜在规则的恰当时刻阅读成果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达高峰，随即逐步减弱，至2小时后即可*衰退至无色。TMB的停止液有多种，叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反响停止。这类停止剂尚能使蓝色保持较长时刻（12-24小时）不褪，是目视判别的杰出停止剂。此外，各类酸性停止液则会使蓝色转变成黄色，此刻可用特定的波长（450nm）测读吸光值。
（2） 比色
比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板准确放入酶标比色仪的比色架中。以软板为载体的实验，需先将板置于规范96孔的座架中，才可进行比色。在加底物液显色前，先将软板边际剪净，这么，此板就可*平妥坐入座架中。比色时应先以蒸馏水校零点，测读底物孔（未经任何反响仅加底物液的孔）和空白孔（以生理盐水或稀释液替代标本作全过程的孔），以记载本次实验的试剂情况。其后可用空白孔以蒸馏水校零点，以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度，然后进行核算。比色成果的表达以往通用光密度（oplical density，OD），现按规则用吸光度（absorbence，A），两者意义相同。通常的表明办法是，将吸收波长写于A字母的右下角，如OPD的吸收波长为492nm，表明办法为"A492nm"或"OD492nm"。
（3） 酶标比色仪
酶标比色仪简称酶标仪，通常指于测读ELISA成果吸光度的光度计。对于固相载体方式的不一样，各有特制的适用于板、珠和小试管的规划。许多试剂公司配套供给酶标仪。酶标仪的主要功能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、准确度和可测规模、线性等等。的酶标仪的读数通常可准确到0.001，准确性为±1%，重复性达0.5%。举例说，若某孔测得的A值为1.083，则该孔相对于空气的实在A值应为1.083±0.01（1.073~1.093），重复测定数次，其A值均应1.083±0.05（1.078~1.088）在之间。酶标仪的可测规模视各酶标仪的功能而不一样。一般的酶标仪在0.000~2.000，新类型的酶标仪上限拓宽达2.900，乃至更高。超出可测上限的A值常以"*"或"over"或其它符号表明。应留意可测规模与线性规模的不一样，线性规模常小于可测规模，比如某一酶标仪的可测规模为0.000~2.900，而其线性规模仅0.000~2.000，这在定量ELISA中制造规范曲线时应予留意。 酶标仪不应安顿在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15~30℃，使用前先预热仪器15-30分钟，测读成果更安稳。测读A值时，要选用产品的灵敏吸收峰，如OPD用492nm波长。有的酶标仪可用双波长式测读，即每孔先后测读两次，在zui适波长（W1），第二次在不灵敏波长（W2），两次测定间不移动ELISA板的方位。例如OPD用492nm为W1，630nm为W2，终究测得的A值为两者之差（W1-W2）。双波长式测读可削减由容器上的划痕或指印等形成的光搅扰。各种酶标仪功能有所不一样，使用中应具体新闻记者说明书。
