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试验室细胞搜集的具体办法过程

阅读:219发布时间:2017-9-11

试验室细胞搜集的具体办法过程,试验室搜集细胞,关于细胞的研讨极为重要,如何搜集细胞成为试验室的必做项目之一,那么下面上海纪宁的博士就带大家一同来了解下以下三种办法:

WB搜集细胞:
将细胞培养基弃掉,用PBS清洗两次,运用*消化细胞或细胞刮,将细胞悬浊液离心1000rpm/5min,弃上清,保存底层细胞。如要裂解细胞6孔板(99ulRIPA+1ulPMSF),细胞培养皿(198ulRIPA+2ulPMSF),若要做磷酸化蛋白则加如1ul按捺磷酸化蛋白降解按捺剂,参加细胞裂解液后用移液器将细胞吹匀,冰上静置5min,离心4℃ 12500g/5min,汲取上清液,置于-80℃冰箱;若不裂解细胞,将细胞置于-80℃冰箱。

一般PCR搜集细胞:
将细胞培养基弃掉,用PBS清洗两次,运用*消化细胞或细胞刮,将细胞悬浊液离心1000rpm/5min,弃上清,保存底层细胞。将细胞置于-20℃冰箱。

qRT-PCR搜集细胞:
将细胞培养基弃掉,用PBS清洗两次,运用*消化细胞或细胞刮,将细胞悬浊液离心1000rpm/5min,弃上清,保存底层细胞。参加1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。(留意:本试验需运用耗材和试剂都为无RNA酶,PBS有必要高压,离心管和枪头有必要无酶


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