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ELIS试剂盒实验内标物的选择及条件

阅读:298发布时间:2017-10-23

日前,有位ELIS试剂盒客户在留言中问道:“做内标法,说用的是内标物,这个内标物和对照品和规范品有什么不同呢?"针对该问题,我公司做出了一个全盘解析:

、什么是内标物?
将一个已知质量,样品中不含有杂质的纯物质,参加至待测样品溶液中,以此纯物质的量为规范,比照测定待测组分的含量,该纯物质称为内标物。

内标物需满意下列要求:能*溶解于样品中,且不与待测组分发作化学作用;峰位尽可能与待测组分的峰位接近,但能与待测组分*分开(别离度R≥1.5)的纯物质。若得不到纯品,有必要预先测定其准确含量,且杂质峰不得干扰待测组分峰。

第二、ELIS试剂盒试验内标法的长处
测定的成果较为准确,因为经过丈量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行核算的,因而在必定程度上消除了操作条件等的改变所引起的差错。内标法的缺陷是操作程序较为费事,每次剖析时内标物和试样都要准确称量,有时寻觅适宜的内标物也有困难。 外标法简洁,但进样量要求非常准确,要严厉控制在与规范物相同的操作条件下进行,不然形成剖析差错,得不到准确的丈量成果。

第三、ELIS试剂盒试验内标物需满意的条件
内标法是结合了峰面积归一法和外标法的长处的一种办法,它在参加内标后,按峰面积归一法的剖析办法进行剖析,这就避免了因为进样的一致性及样品轻视效应导致的偶然差错,因而,它的剖析精密度也是比较高的,是气相色谱的一种比较抱负的定量剖析办法。它的缺点是前处理比较复杂,所花费的时间也比较长,一起有必要要有适宜的标样及内标物才能进行内标法定量剖析。关于内标法定量剖析来说,内标物的挑选是及其重要的。

它有必要满意如下的条件:
① 内标物与被剖析物质的物理化学性质要类似;
② 内标物应能*溶解于被测样品(或溶剂)中,且不与被测样品起化学反应;
③ 内标物的出峰方位应该与被剖析物质的出峰方位相近,且又不共溢出,目的是为了避免GC的不稳定性所形成的灵敏度的差异;
④ 挑选适宜的内标物参加量,使得内标物和被剖析物质二者峰面积的匹配性大于75%,避免因为它们处在不同响应值区域而导致的灵敏度误差。

第四、ELIS试剂盒试验内标法的操作
① 将已知量的内标样参加规范样品,制成混合标样,并配制一系列的已知浓度的作业标样。混合标样中标样与内标样的摩尔比不变。
② 注入色谱柱,以(标样峰面积/内标样峰面积)为响应值。
③ 依据响应值与作业标样浓度之间存在的线性关系,即W=f×A,制成规范曲线。
④ 将已知量的内标样参加不知道样品,注入色谱柱,得到欲测组分的响应值。
⑤ 依据已知的系数f,即可求出欲测组分的浓度。

第五、ELIS试剂盒试验内标法的特色
操作过程中样品和内标是混合在一起注入色谱柱的,因而只要混合溶液中被测组分与内标的量的比值稳定,上样体积的改变不会影响影响定量成果。
内标法抵消了上样体积,甚至流动相、检测器的影响,因而比外标法准确。


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