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阅读:537发布时间:2017-11-6
ELISA试剂盒实验需根据自身需求选择96孔板或是384孔板进行ELISA实验。
现在查看ELISA有很多途径,我们可以根据自个的偏好进行选择。一般ELISA查看的是酶促反应的可溶性产品,抗体上联络有相应的酶(例如一般运用的辣根过氧化物酶HRP),而反应体系中添加有相应的底物(如3,3-二氨基联苯胺DAB)。
ELISA试剂盒尽管有多种类型,不过它们都有一个一起特征,就是进行抗原捕获。
一般捕获方法包括将抗原吸附到微孔板或许用微孔板上的抗体进行捕获。
In-cell ELISA和酶联免疫斑斓ELISPOT是两种格外的类型,In-cell ELISA需求将微孔板中培养的细胞进行固定和通透化,然后再用抗体原位查看。ELISPOT有点像蛋白印迹Western blot,先在带膜的微孔板中培养细胞,然后在膜上查看细胞分泌的抗原构成斑斓。
这种酶促反应生成具有特征性的颜色,可以经过分光光度计进行查看,碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。
ELISA试剂盒在用双抗夹心法进行ELISA查看时,查看用的二抗有必要特异性关于查看一抗,而不能与捕获抗体起反应。
假设查看用二抗与捕获抗体联络,实验特异性就会大打折扣。
一般我们选用源自不一样宿主的捕获抗体和查看一抗,来避免上述疑问。
酶可以联络在一抗上,也可以联络在二抗上,还可以运用链霉亲和素符号的酶与亲和素符号的一抗联络。此外ELISA的效果查看还包括放射性查看、荧光查看、化学发光或显色法查看等。
单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于ELISA试剂盒,ELISA试剂盒实际上有时候二者联络效果非常好。例如,关于双抗夹心法而言,用多抗进行捕获而单抗进行查看有时更有协助。
多抗可以保证捕获全部抗原,随后单抗再特异性查看具有特定抗原表位的抗原。
假设抗体间发生抵触或交叉反应就会影响全部实验的特异性。
ELISA试剂盒其间抗体来历所带来的兼容性就是交叉反应的一个要素。尽管现在收购源自动物的抗体越来越简略,我们仍有必要招认一下是不是会发生交叉反应的疑问。
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