的ELISA试剂盒，杰出的仪器和正确的操作是确保ELISA检测成果准确牢靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的构成不同而有所差异，国内医学查验一般均用板式点。
洗刷在ELISA进程中虽不是一个反响进程，但却也决议着实验的成败。ELSIA就是靠洗刷来到达别离游离的和结合的酶符号物的意图。经过洗刷以铲除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反响进程中非特异性地吸附于固相载体的搅扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗刷时又应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。可以说在ELISA操作中，洗刷是zui主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严厉按要求洗刷，不得马虎。
一般说来，ELISA试剂盒在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超越一周测定的需低温冰存。冻住血清融解后，蛋白质部分浓缩，散布不均，应充沛混匀宜轻缓，防止气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上激烈振动。混浊或有沉积的血清标本应先离心或过滤，弄清后再检测。反复冻融会使抗体效价下跌，所以测抗体的血清标本如需保存作屡次检测，宜少量分装冰存。保存血清自收集时就应留意无菌操作，也可参加适当防腐剂试剂的预备按试剂盒说明书的要求预备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包含用于洗刷的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液使用pH计丈量较正。从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后运用。试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行溅起，不行发作气泡。加标本一般用微量加样器，按规则的量参加板孔中。每次加标本应更换吸嘴，避免发作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规则的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参加稀释液，再在其间参加血清标本，然后在微型震动器上震动1分钟以确保混和。加酶结合物使用液和底物使用液时可用定量多道加液器，使加液进程迅速完结。在ELISA中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需要有一定的温度和时刻，这一保温进程称为温育（incubation），有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例，参加板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的机会，只要zui靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。这是一个逐渐平衡的进程，因而需经分散才干到达反响的结尾。在这以后参加的酶符号抗体与固相抗原的结合也相同如此。这就是为什么ELISA反响总是需要一定时刻的温育。温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。
在树立ELISA试剂盒方法作反响动力学研讨时，实验标明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为*，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中，以构成zui多的沉积。但因所需时刻太长，在ELISA中一般不予选用。
