男女呻吟久久免费视频 信帆生物：单细胞凝胶电泳的操作流程与注意事项

单细胞凝胶电泳(又名彗星实验)的操作流程主要包括单细胞悬液的制备、凝胶板制备、细胞裂解与解旋、电泳与中和、染色和观察等步骤。本文总结了单细胞凝胶电泳操作步骤和注意事项，希望对初入实验的同学有帮助。

1、分离制备单细胞悬液：

(1)体外培养的细胞株：用胰酶消化，zui后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液，细胞要计数，具体的量我前边已经说过。

(2)体内脏器细胞：处死动物，取出脏器，于hanks’液中制备成单个细胞悬液。

2、胶板制备：

(1)取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA，铺于磨沙载玻片上，形成底胶。盖玻片推匀，不能有气泡，4度凝固5至8分钟。

(2)水平取下盖片，取100μl于37℃水浴中保温的0.5%LMA与20μl细胞悬液(约400个细胞)混匀，立即铺片，加上盖玻片，4度凝固5至8分钟。

3、细胞裂解与电泳：

(1)将制备好的胶板去掉盖玻片后，浸于4℃预冷的细胞裂解液中，在4℃下裂解2.5到3小时。

(2)取出胶板，用双蒸水浸没漂洗后放入电泳槽中，浸泡在4℃预冷的电泳液中解旋20分钟。

(3)玻片水平放置阳附近，4℃电泳20到25分钟(25V，300mA)。可在电泳槽周围加冰块以保持低温。

4、中和与染色：

(1)电泳结束，将胶板浸泡于中和液中，每次10分钟，共中和3次，每次要更换中和液。zui后晾干。

(2)取出胶板，置于染色缸中，在2μg/ml的EB染色液中，暗处染色5到10分钟。

(3)蒸馏水漂洗2次，每次5分钟。

稍晾干，滤纸吸去多余水分，尽快在荧光显微镜下观察。

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