将待测蛋白配成合适浓度

    另取3支清洁试管，编号8、9、10，用微量注射器按表6-2操作，将待测蛋白配成系列浓度。

待测蛋白的稀释

加入G250试剂

    各试管充分混匀后，用取样器分别加入5.0mL考马斯亮兰G250试剂，每加完一管，立即混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。

比色

    各管室温静置2～5min后，在分光光度计上测定595nm处的光吸收值A ₅₉₅ ，空白对照为第1号试管，标准和待测蛋白样同时比色。

    注意：不可使用石英比色皿（因不易洗去染色），只能使用玻璃比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇润洗，洗去颜色。

制作标准曲线

    以标准蛋白质浓度（mg/mL）为横座标、吸光度值A ₅₉₅ 为纵座标作图，即得到一条标准曲线。

根据标准曲线计算待测蛋白浓度

    在标准曲线上，根据测出的待测样品的A ₅₉₅ 值，查出试管中蛋白质浓度，再按照计算公式：