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淋巴细胞及其功能检测常用于对机体免疫状态进行评估及对疾病疗效的监控。
(一)淋巴细胞数量检测
1.T细胞数量检测 常用间接免疫荧光法,检测T细胞表面的CD3、CD4、CD8,来 了解外周血T细胞数量及亚群的变化。外周血T细胞亚群正常值为CD3+T细胞占60%~ 80%,CD4+T细胞占55%~ 60%,CD8+T细胞占20 ~ 30%,CD4+/C D8+T细胞比值一般为2∶1。
2.B细胞数量检测 常用直接免疫荧光法,检测B细胞表面Sm Ig 来了解成熟B细胞的数量。正常人外周血Sm Ig +细胞一般为8% ~ 12%。
(二)淋巴细胞功能检测
1.T细胞功能检测 常用的检测方法有淋巴细胞转化试验(又称淋巴细胞增殖试验)、细胞毒试验及细胞因子检测。
(1)淋巴细胞转化试验:T细胞在体外受特异性抗原物质或非特异性丝裂原(如 PHA、ConA 等)刺激后,能转化为体积大、代谢旺盛且能进行分裂的淋巴母细胞。T细胞的这种转化(或增殖)可分别用形态观察法、3H-TdR(氚标记胸腺嘧啶核苷)掺入法及MTT法检测。正常人的T细胞转化率为70%左右。
(2)细胞毒试验:Tc细胞、NK细胞对其靶细胞有直接杀伤作用。根据待检效应细胞的性质,选用相应的靶细胞如肿瘤细胞、移植供体细胞等共同培养,然后测定效应细胞的杀伤活性。常用方法有:51Cr释放法、凋亡细胞检测法。
(3)细胞因子检测法 不同T细胞亚群分泌细胞因子不同,因此,根据细胞因子种类可间接反映T细胞亚群的功能。检测细胞因子常用的方法有ELISA、生物活性测定法、PCR。(4)皮肤试验 正常机体对某种抗原建立的细胞免疫与迟发型超敏反应往往同时存在,故测定机体对某种抗原的迟发型超敏反应可间接反映出机体的细胞免疫功能,如结核菌素(OT)试 验等。
2.B细胞功能检测 用于检测B细胞功能的方法有B细胞增殖试验和抗体形成细胞测定法。
(1)B细胞增殖试验:B细胞受丝裂原(如 LPS、SPA等)刺激后,可进行分裂增殖成为淋巴母细胞。检测3H-TdR掺入率可判断B细胞增殖的能力。
(2)抗体形成细胞测定:常用溶血空斑试验,即测定对羊红细胞上的抗原产生抗体形成细胞数目。其基本原理是抗体形成细胞分泌的免疫球蛋白与羊红细胞上的抗原结合,在补体参与下,出现溶血反应。周围有溶血空斑出现的细胞即为抗体形成细胞,溶血空斑数即为抗体形成细胞数。
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