本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中肺炎病毒（PVM）表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠肺炎病毒（PVM）表达。用纯化的大鼠肺炎病
毒（PVM）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中肺炎病毒（PVM）相结合，经洗
涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP 标记的肺炎病毒（PVM）抗体结合，形成抗体
抗原 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化
成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），
与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中大鼠肺炎病毒（PVM）的存在与否。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液
2 酶标试剂
3 酶标包被板
4 样品稀释液
5 显色剂 A 液
6 显色剂 B 液
标本要求
20ml×1 瓶
6ml×1 瓶
12 孔×8 条
6ml×1 瓶
6ml×1 瓶
6ml×1/瓶
7 终止液
8 阳性对照
9 阴性对照
10 说明书
11 封板膜
12 密封袋
6ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
1 份
2 张
1 个
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50!l。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40!l，然后再加待测样品 10!l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50!l，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50!l，再加入显色剂 B50!l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50!l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为肺炎病毒（PVM）阴性
阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为肺炎病毒（PVM）阳性
。
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
