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大鼠肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）的操作步骤及注意事项
2011-3-2 阅读(2359)
操作步骤
1. 标准品的稀释：大鼠肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 600 ng/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 300 ng/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 150 ng/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 75 ng/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 37.5 ng/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
3. 温育：用封板膜封板后置
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项
1．大鼠肠脂肪酸结合蛋白（iFABP）试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
