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上海劲马实验设备有限公司
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细胞复苏的具体操作
2011-3-23 阅读(2275)
上海劲马实验设备有限公司专业经营生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品，致力于向国内生命科学研究人员提供*的产品和服务。 我们代理和经销的分子生物学试剂、生化试剂、免疫试剂、细胞培养试剂、制药工业原料、实验仪器与消耗品、临床诊断产品等，已被广泛应用于生命科学基础与开发研究、制药、疾病诊断、人口与健康、生物技术等诸多领域。我们的客户遍布大学、研究所、医院、制药公司、生物技术公司和工业等单位。
1. 收到细胞株包裹时， 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存（置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2）。
细胞复苏的原则－快速融化：
必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
具体操作
一. 实验前准备：
1.将水浴锅预热至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。
二．取出冻存管：
1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。
2.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
三．迅速解冻：
1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
2.约1-2min后冻存管内液体*溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
四.平衡离心：用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3min
五.制备细胞悬液：
1.吸弃上清液。
2.向离心管内加入10ml培养液，吹打制成细胞悬液。
六.细胞计数：细胞浓度以5×105/ml为宜。
七.培养细胞将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内2-4小时（或者24-48小时）后换液继续培养培养，换液的时间由细胞情况而定
