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人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）实验原理及操作步骤
2011-5-9 阅读(1237)
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上海劲马实验设备有限公司 |  资料大小 |
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人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 B 细胞淋巴瘤因子 2（Bcl-2）水平。用纯化的
人 B 细胞淋巴瘤因子 2（Bcl-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次
加入 B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2），再与HRP标记的B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）抗体结合，
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催
化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 B 细胞淋巴
瘤因子 2（Bcl-2）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线
计算样品中人 B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）浓度。
人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
80μg/L 5 号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
40μg/L 4 号标准品 150μl的5 号标准品加入150μl标准品稀释液
20μg/L 3 号标准品 150μl的4 号标准品加入150μl标准品稀释液
10μg/L 2 号标准品 150μl的3 号标准品加入150μl标准品稀释液
5μg/L 1 号标准品 150μl的2 号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
