细菌基因组*说明书报价

试剂盒组成：
 D1600-20 D1600-50 D1600-100次
Rnase A 400μl 1ml    2ml
蛋白酶K 400μl 1ml    2ml
溶液A 4ml 10ml    20ml
溶液B 4ml 10ml   20ml
漂洗液 6ml 15ml    30.ml
洗脱液 4ml 10ml    20ml
吸附柱 20个 50个 100个
收集管 20个 50个 100个
 

 细菌基因组*说明书报价

说明书 1份 1份 1份
  注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间保存可置2℃-8℃

产品简介：
    本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和缓冲液系统提取细菌的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*的新型材料，能够、专一吸附DNA，可zui大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提高的基因组 段大，纯度高，质量稳定可靠。
        使用本试剂盒提取的细菌基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。

操作步骤：
   使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、 取细菌培养液1ml，12000rpm离心1min,尽量吸尽上清。
2、 向细菌沉淀中加入200ul溶液A，振荡至菌体充分悬浮（如果仕革兰氏阳细菌，可在次步骤中加入终浓度为20mg/ml的*），加入200ul  10mg/ml的RNase A,37℃放置15-30min.
3、 向管中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混均，55℃消化30-60min，期间可颠倒离心管混均次数，直至样品消化*为止。消化*的标志是：液体清亮及粘稠。
4、 向管中加入200ul溶液B,充分混均。如出现白色沉淀，可放75℃15-30min，沉淀既会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不*，可能导致DNA量少及不纯，还有可能导致上柱后堵柱子。
5、 向管中加入200ul无水乙醇，充分混均，此时可能回出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min
6、 12000rpm离心1min，废弃液，将吸附柱放入收集管中。
7、 向吸附柱中加入700ul漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min,废弃液，将吸附柱放入收集管中。
8、 向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min,废弃液，将吸附柱放入收集管中。
9、 12000rpm离心2min，将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残留的漂洗液去除，否者漂洗液中的乙醇回影响后续的实验如酶切、PCR等
10、 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜*悬空滴加500-200ul经75℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
11、 离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm,离心2min,即可得到高质量的细菌基因组DNA.
注意事项：
1、 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 段较小且提取量也下降。
2、 若溶液A或溶液B中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。
3、 如果样品消化不*，后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况，可适当延长离心时间。
4、 洗脱缓冲液的体积不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的PH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其PH值在8.0左右（可用NaOH将水的PH值调至此范围），PH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5、 DNA浓度及纯度检测：得到的基因组 段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著收峰，OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA、40ug/ml单链DNA。OD260/ OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为PH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
 

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