加A试剂盒说明书

A-Tailing Kit

加A试剂盒

目录号：YJ0803

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组分说明

                    Cat. No.                       YJ0803

                    Size                             20次

                    A-Tailing Enzyme（5 U/μl）         25 μl

                    10×A-Tailing Buffer             120 μl

                    dATP，2 mM                        25 μl

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

    产品简介

    　　利用具有3’-5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶，如Pfu等进行PCR扩增时，其PCR产物为不带  A尾的平末端  DNA片段，如想将该片段克隆到     T载体上，需要先利用A-Tailing  Enzyme在平末端片段后加上A尾后才能与T载体上3’末端的T碱基互补连接。

    本产品是在平末端 DNA片段的3’末端添加一个A尾，使平末端的 DNA片段进行TA克隆

成为可能。本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分，可以在30分钟完成整个过程。与平

    末端DNA片段克隆相比，TA克隆具有较高的克隆效率，可大大提高实验成功率。

    使用方法

    1．将平末端PCR产物进行纯化，若 PCR无非特异扩增可用 DNA产物回收试剂盒进行纯化，若 PCR产物有非特异性扩增可用胶回收纯化试剂盒进行纯化。

    2．将以上纯化好的平末端DNA片段按以下反应体系加A尾：

                           试剂                      10 μl体系

                           平末端 DNA片段             X μl（<1 μg）

                           dATP                       1 μl 

                           10×A-Tailing Buffer        1 μl 

                           A-Tailing Enzyme           1 μl 

                           RNase-Free Water       补足至 10 μl 

    3．轻轻混匀后72℃孵育30 min。

       注意：加A尾的产物可以不需要再次纯化，可直接用于连接反应。