HiFiScript快速去基因组cDNA*链合成试剂盒说明书

HiFiScript Quick gDNA Removal

cDNA Kit

HiFiScript快速去基因组cDNA*链合成试剂盒

目录号：YJ2582

保存条件：-20℃。

规格说明

     Cat. No.                    YJ2582-25       YJ2582-100

     Kit Size                         25              100

     gDNA Eraser                    12.5 μl          50 μl

     10×gDNA Eraser Buffer           30 μl           120 μl

     HiFiScript，200 U/μl             25 μl           100 μl

     5×RT Buffer                    120 μl           500 μl

     Primer Mix                      30 μl           120 μl

     RNase-Free Water                1 ml            2×1 ml

        本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　本产品是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃，2 min即可

除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制gDNA  Eraser的组分，经过   gDNA

Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型反转

录酶HiFiScript，新颖突变位点大幅提升酶的转录活性，  cDNA*链合成的效率和产

量更高，可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNA*链。如逆转录产物cDNA用于下

游荧光定量检测，可在42℃，15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于*链 cDNA的

合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。

产品特点

1．快速去除基因组：含有去除基因组DNA的gDNA  Eraser，只需 2 min即可除去基因

   组DNA。

2．快速逆转录：15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNA*链合成。

3．灵敏度高：可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNA*链。

4．的逆转录效率：新颖突变位点大幅提升酶活性能，获得更高产量的cDNA。

注意事项

1．在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人

   员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。

2．逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于

   -20 oC保存，并尽量避免反复冻融。

3．反应体系可倍比放大，10 μl反应体系可zui大使用1μg总RNA。

4．Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成，也可根据实验需要选用

   Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。

5．若起始RNA的量小于50 ng，建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）。本试剂盒并未提

   供，如需要可单独向本公司订购，货号为YJ0596。

6．对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5分

   钟立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤

    将模板RNA在冰上解冻；试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶

液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

一、去除基因组DNA反应

1．根据以下表格在冰上配制反应体系，总体积为10 μl。为了保证反应液配制的准确性，先按反应数+2的量配制预混体系，然后再分装到每个反应管中，zui后加入RNA样品。

                    试剂                           10 μl反应体系

                    10×gDNA Eraser Buffer          1 μl

                    gDNA Eraser                   0.5 μl

                    RNA Template1）               10 pg-1 μg

                    RNase-Free Water             up to 10 μl

   注意：1）如果总RNA量大于1 μg，请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50 ng，则建议   

   加入RNA酶抑制剂（RNasin），该产品货号为YJ0596。

2．涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

3．42℃孵育2分钟（室温反应时，可以延长到30分钟）。

4．反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

二、逆转录反应

1．根据以下表格在冰上配制反应体系，反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的

   准确性，先按数+2的量配制成预混溶液，然后再分装 10 μl到每个反应管中，取配制的预混液10 μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。

                    试剂                           20 μl反应体系

                    步骤1反应液                         10 μl

                    HiFiScript，200 U/μl            1 μl

                    Primer Mix 1）                  1 μl

                    5×RT Buffer                    4 μl

                    RNase-Free Water               4 μl

   注意：1）  可根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议20 μl 反应体Oligo-dT Primer 50pmol，或Gene Specific Primer 2 pmol。

2．混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

3．3．cDNA合成反应条件：

     1）若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。

     2）若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。

注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。

 4．反应结束后，短暂离心后置于冰上，再进行后续PCR或荧光定量PCR，如果需要长时

      间保存，请置于-20℃。

  注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

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