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PVDF印记膜技术交流 纯客户角度出发，公司不做任何修改和评论
点击次数：2698 发布时间：2013-11-12
PVDF膜
刚开始做WB的人也许会有这种疑问：为什么实验室的老师（或者师兄师姐们）在教我们做WB的时候，如果是用PVDF膜做，总是小心翼翼的剪，节省着用，甚至一些边边角角也舍不得丢掉呢？其实，这不仅是因为PVDF膜比较贵，还由于PVDF膜是做WB的“*”。
聚偏二氟乙烯（PVDF）膜作为基质的转印膜由Millipore公司在1985年首先推出。与硝酸纤维素膜相比，PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都更*的性能（Pluskal,et al.,1986）。市售硝酸纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是100-200μg/cm2（而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍！）。在艾滋病毒（HIV）血清学检验中直接比较PVDF和硝酸纤维素膜，PVDF膜具有更好的截留总HIV抗原能力并提高抗体检测糖基化被膜抗原的性能。但是PVDF膜zui大的优点不仅于此：更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，如考马斯亮蓝染色后切出条带并进行N-末端测序、蛋白消化/肽分离/内部测序和免疫检测（Kurien,et al.,2003）。特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白测序的*选择。此外，个人经验，一些强疏水蛋白用PVDF膜效果会更好一些。PVDF膜适用的检测方法也不少，化学发光、常规显色、同位素和标准染色都一样OK，但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理（不超过15秒）再用缓冲液平衡，才能用，而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理（不过要真出现这种问题也是自己欠扁，谁要你不小心呢，转膜前处理也就罢了，转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别呢）。PVDF膜同样分0.45um和0.2um的，后者孔径小，对小分子蛋白有较好的拦截吸附，背景可能会比前者稍高。
PVDF膜常见的有以下几个品牌
公司 | 产品名 | 孔径 | 适用范围 | 参考价格 |
Millipore | Immobilon Transfer Membranes | 0.45um 0.2um |
| 2050.00 |
Bio-Rad | Immun-Blot PVDF Membrane |
| Chemiluminescent, colorimetric western blots, amino-terminal sequence and total amino acid composition |
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Pierce | PVDF Membrane | 0.45um 0.2um | Western, Southern, Northern, and dot blots |
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Pall Life Science | BioTrace PVDF Transfer Membrane | 0.45um | Nucleic acid and protein transfers. Protein sequencing | 2200.00 |
Invitrogen | PVDF Membrane | 0.45um | Protein sequencing, immunoblotting |
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Whatman | Westran Clear Signal PVDF Membrane | 0.45um | Western blots |
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作为PVDF膜的*，Millipore公司的PVDF膜Immobilon系列分为Immobilon-P（0.45um）, -PSQ（0.2um）, -FL（用于荧光显色）和Blotting Sandwiches for High Troughput四种。Immobilon-P膜孔径均一，具有*的吸附能力，染色性能好、抗溶剂能力强和信噪比高，有助于提高检测灵敏度，而且开放的孔结构容易接近被吸附的蛋白质，并有助于去除背景上没有吸附的探针，可以说是免疫印迹检测理想的印迹膜。Immobilon-PSQ转印膜是印迹小分子蛋白质（<20KDa）的理想选择——优良的蛋白质吸附性能，渗漏少。内表面面积较大，可供蛋白质吸附从而提高蛋白质测序的得率。由于不含污染性支撑物或表面活性剂，Immobilon-PSQ层析谱上的背景峰值极小。Immobilon-FL也是Millipore值得骄傲的产品，因为这是*个专门为荧光显色优化的转移膜。通过实验证明，这种膜在Kodak成像系统可以显示仅7ng的蛋白，听起来不错吧，有兴趣可以试一试。这几种膜除了一般的PVDF膜的优点之外，zui大特点就是一个字——快。按照Millipore的操作手册，Immobilon可以在保证质量的前提下缩短WB时间到2个小时——主要是缩短封闭和洗脱时间。这可真是个好消息，因为坐在那儿等WB结果多浪费时间啊！缩短这个费时而枯燥的过程，早出结果，可以提高实验效率，利于我们分析实验结果，考虑下步对策嘛。卷膜经济实惠，裁剪剩下的边角料还可以用来做点杂交，而预裁剪的即用膜更适合高通量等等“用金钱换时间”的实验。再次强调的是，疏水PVDF膜在用前必须经过50%或以上体积比的甲醇或者乙醇溶液处理几分钟，待膜变成半透明后用MilliQ水或者纯水漂洗一下，转入电泳缓冲液平衡才能用。