大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)泡素(FSH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH),再与 HRP标记的大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗。用纯化的大鼠促卵涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)浓度。
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过(HRP)活性。
大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50ml,待测样品孔中先加样品稀释液 40ml,然后再加待测样品 10ml(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有析出,稀释时可在浴中加温助溶,洗涤时不影响
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内,如标本数量多,*使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔*孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒本试剂不同批号组分不得混用。