1、直接法免疫血清的制备

取体重2～3Kg的雄鸡1只，免疫前采血8～10mL，测其正常抗体。静脉注射新城疫弱毒新鲜尿囊液病毒2mL，同时腹腔注射8mL，2～4d后同法再免疫一次。第二次免疫后七天试血，血清凝集价在1︰320以上为合格即可全采血；如果不合格，可在第二次免疫后10d左右，用同法再免疫一次，一般都可获得价的免疫血清。制备抗病血血清时。抗原量要大，间隔日期要短。

2、免疫球蛋白抗血清制备方法
此法用于制备间接法抗抗体。因抗原为可溶性，故多需加佐剂。

（1）淋巴结注射法

1）选择体重2～3Kg的健康雄性家兔（ 2只以上），编号；

2）在家兔两后脚掌共注射活卡介苗，50mg（约0.6mL．每只足庶部皮下0.1mL，皮内0.2mL）。7～10d后，鼠或国窝处淋巴结肿大如黄豆或蚕豆大小；

3）用二指固定肿大之淋巴结，两侧淋巴结各注射加有*佐剂的抗原o．5mL，共1mL。事先将抗原稀释为 5～10mg/ml，在免疫前一日加入青、*，使青、*的浓度分别为1000U/mL和1000mg／mL。4℃过夜，次日取出与佐剂混合成乳剂。许多单位用两个注射器分别吸取佐剂与抗原，中间用细胶管连接，相互推进若干次，达到乳化目的；

4）10～14d后，于两侧淋巴结各注射加有*佐剂的抗原0.25～0.5mL（这一次也可以省略）；

5）7d后，于两侧淋巴结各注射加有不*佐剂的抗原0.25～0.5mL；

6）试血：第三次免疫后7～10d，耳静脉取少量血，分离血清，用双扩散法，中间孔加抗原（1mg/mL），周围孔加不同稀释度的待检抗血清，37℃、 24h，观察结果，效价在1︰16以上，或者中间孔加抗血清，周围孔加不同稀释倍数的抗原。效价达4000倍以上即可应用；

7）放血：效价合格后即可放血。放血前停食12h。动物仰卧固定，颈部剪毛消毒，切开皮肤lOcm，找到颈动脉，将颈动脉和迷走神经剥离。选择血管中段，用两*夹住（约 5cm），切开，放血（2500g重家兔可放血lOOmL）；
8）分离血清：血液放于大试管、平皿或三角瓶中，凝固后，用铂耳或无菌滴管沿边缘剥离，先故37122h，再放4℃过夜，使血清充分析出。离心沉淀，鉴定合格，冰箱保存备用。

（2）皮下多点注射法

1）家兔两侧脚掌，各注加有*佐剂的抗原0.5mL，共1mL；

2）7～10d后，脊柱两侧多点注射（颈椎附近二点，胸椎腰椎两侧四点，共六点），每点0.5mL；

3）7～10d 后再注一次加有不*佐剂的抗原，每点0.5mL；

4）7～10d后试血，合格者放血；不合格，每周用加不*佐剂的抗原加强免疫一次，共两周，再试血。

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