行业产品

  • 行业产品

上海星科生物科技有限公司


当前位置:上海星科生物科技有限公司>技术文章>使用ELISA试剂盒的具体步骤有哪些?
技术文章

使用ELISA试剂盒的具体步骤有哪些?

阅读:146发布时间:2016-5-26

使用ELISA试剂盒的具体步骤有哪些?

双抗体夹心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

间接法 1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜; 2.次日洗涤3次; 3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤; 4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml; 5.37℃孵育35-60分钟,洗涤; 6.’zui后一遍用DDW洗涤。 其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

 

ELISA试剂盒组成及试剂配制

1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。

2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。

3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4、*标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6、*标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

 

公司专业供应的ELISA试剂盒,*,质量可靠,货期短。我司承诺:如有质量问题免费包退换(非人为因素),我们提供价格、用途、配制方法、实验注意事项等一系列详细信息。咨询订购吧!

 


环保在线 设计制作,未经允许翻录必究 .      Copyright(C) 2021 http://www.gsrxyx.com,All rights reserved.

以上信息由企业自行提供,信息内容的真实性、准确性和合法性由相关企业负责,环保在线对此不承担任何保证责任。 温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买产品前务必确认供应商资质及产品质量。

会员登录

×

请输入账号

请输入密码

=

请输验证码

收藏该商铺

登录 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我们将在第一时间回复您~