女人天天干夜夜爽视频 常用免疫组织化学染色方法

(一)、ABC法：
(注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行) 
1.切片经二甲苯Ⅰ 5分钟。 
2.切片经二甲苯Ⅱ 5分钟。 
3. *Ⅰ 30秒。 
4. *Ⅱ 30秒。 
5. 95% 酒精Ⅰ 30秒。 
6. 95%酒精Ⅱ 30秒。 
7. 90%酒精 30秒。 
8.80%酒精 30秒。 
9. 70% 酒精 30秒。 
10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是1-10) 
11.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 
12.水洗。 
13.抗原修复。 
14.PBS洗3次，1分钟/次。 
15.加入血清孵育 20分钟。 
16.摔干血清，加入一抗60分钟。 
17.PBS洗3次，2分钟/次。 
18.加入二抗孵育30分钟。 
19.PBS 洗3次，2分钟/次。 
20.加入ABC复合物，孵育30分钟。 
21. PBS洗3次，2分钟/次。 
22.DAB-H2O2 孵育切片5-10分钟。 
23.PBS洗，水洗。 
24.Harris苏木素染核5-10分钟。 
25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。 
(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln) 
1.切片脱蜡至水。 
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10-20分钟。 
3.水洗。 
4.抗原修复。 
5.PBS洗3次，1分钟/次。 
6. 加入血清孵育10分钟。 
7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分钟。 
8.PBS洗3次，每次2分钟。加入二抗，孵育20分钟。 
9.PBS 洗3次，每次2分钟。 
10.加入SP复合物孵育20-30分钟。 
11.PBS洗3次，每次2分钟。 
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。 
13.PBS洗，水洗。 
14.Harris苏木素染核5-10分钟。 
15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固。 
(三)真空负压LSAB法 
1.切片脱蜡至水。 
2. 0.3%H2O2甲醇真空负压处理5min. 
3. 水洗。 
4.如果需要，可进行抗原修复。 
5.PBS洗3次，每次1分钟。 
6.加入正常血清真空负压处理5min。 
7.摔干血清，加入*抗体，真空负压处理5分钟。 
8. PBS洗3次，每次2分钟。 
9. 加入二抗(即连接抗体)真空负压处理5分钟。 
10.PBS洗3次，每次2分钟。 
11.加入链卵蛋白复合物，真空负压处理 5分钟。 
12.PBS 洗3次，每次2分钟。 
13.DAB-H2O2孵育5-10分钟。 
14.PBS洗，水洗。 
15.染核，分化，蓝化，脱水，透明并封固。 
注：真空负压即将真空干燥中抽成真空。负压达66.7KPa(500mmHg) 
(四)Envision TM Systems. 
1.切片脱蜡至水。 
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。 
3.水洗。 
4.抗原修复。 
5.PBS 洗3次，每次1分钟。 
6.加入一抗体孵育30-60分钟。 
7.PBS洗3次，每次2分钟。 
8.加入增强剂孵育20-30分钟。 
9.PBS洗3次，每次2分钟。 
10.加入酶标抗兔/鼠，复合物，孵育20-30分钟。 
11.PBS洗3次，每次2分钟。 
12.DAB-H2O2孵育5-10分钟。 
13.PBS洗，水洗。 
14.Harris 苏木素染核5-10分钟。 
15.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。 

(五)免疫组化双染色法。(ⅰ) (Ionmuno- Histochemistry double staimimg method)
1.切片脱蜡至水。 
2.0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。 
3.水洗。 
4.抗原修复。 
5.PBS洗3次，每次1分钟。 
6.加入非免疫性动物血清，孵育 10分钟。 
7.PBS洗3次，每次2分钟。 
8.加入*抗体孵育60分钟。 
9.PBS洗3次，每次2分钟。 
10. 加入生物素化的第二抗体，孵育10分钟。 
11.PBS洗3次，每次2分钟。 
12.加入链卵蛋白素过氧化物酶孵育10分钟。 
13.PBS 洗3次，每次2分钟。 
14.加入DAB-H2O2孵育5-10分钟。 
15.PBS洗3 次，每次2分钟。 
16. 加入双染增强液，孵育10分钟。 
17. 加入非免疫性动物血清孵育10分钟。 
18. PBS 洗3次，每次2分钟。 
19. 加入选用的第二种抗体孵育60分钟。 
20. PBS洗3次，每次2分钟。 
21. 加入生物素标记的第二抗体孵育10分钟。 
22. PBS洗3次，每次2 分钟。 
23. 加入链卵蛋白素碱性磷酸酶孵育10分钟。 
24. PBS洗3次，每次2分钟。 
25. 加入AEC溶液，孵育5-10分钟。 
26. 自来水洗。 
27. 苏木素染核5-10分钟。 
28. 水性封片。 
注：1. *种复合物也可先用链卵蛋白素碱性磷酸酶。 
2.第1次显色也可用BCIP/NBT溶液，颜色为蓝黑色，但应与苏木素鉴别。 
(六)、免疫组化的双染色法(ⅱ) (Immuno-histochemistry double staining method) 
1.切片脱蜡至水。 
2.0.3%H2O2 甲醇处理切片10分钟。 
3.水洗。 
4.抗原修复。 
5.PBS洗3次，每次1分钟。 
6.加入选用的*抗体孵育 30-60分钟。 
7.PBS洗3次，每次2分钟。 
8.加入增强剂孵育20-30分钟。 
9.PBS洗3次，每次2分钟。 
10. 加入酶标抗兔/鼠，复合物，孵育 
11.PBS洗3次，每次2分钟。 
12.加入DAB-H2O2孵育5-10分钟 
13.PBS洗3次，每次2分钟。 
14.加入选用的第二种抗体孵育60分钟。 
15.PBS洗3次，每次2分钟。 
16. 加入增强剂孵育20-30分钟。 
17. PBS洗3次，每次2分钟。 
18. 加入酶标抗兔/鼠碱性磷酸酶复合物孵育20-30分钟。 
19.PBS洗3次，每次2分钟。 
20.加入AEC溶液孵育5-10分钟。 
21.自来水洗。 
22.苏木素染核5-10分钟。 
23.水性封片。 
(七)细胞培养片免疫荧光染色法。 
1.将细胞于载片或盖玻片的片子用理盐水洗几次。 
2.纯丙酮固定10分钟。 
3.PBS 浸洗3次，每次1分钟。 
4.加入选用的*抗体孵育120分钟。 
5.PBS洗3次，每次2分钟。 
6.加入荧光抗体孵育60 分钟以上。 
7.PBS法3次，每次2分钟。 
8.0.1%伊文氏蓝衬染3分钟。 
9.水洗，蒸馏水洗。 
10. 水性胶封片或用缓冲甘油封片。 
(八)真空负压免疫荧光染色法染细胞培养片。 
1. 将细胞爬于载玻片或盖玻片的片子用理盐水浸洗数次，*洗去蛋白液。 
2.纯丙酮固定5-10分钟。 
3.PBS 浸洗3次，每次1分钟。 
4.加入选用的*抗体孵育真空负压处理15分钟。 
5.PBS洗3次，每次2分钟。 
6.加入荧光抗体孵育真空负压处理15分钟。 
7.PBS洗3次，每次2分钟。 
8.0.1%伊文氏蓝衬染3分钟。 
9.水洗，蒸馏水洗。 
10. 水性胶封片或用缓冲甘油封片。

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