细胞：Capan-1细胞
中文名称：人胰腺癌细胞
生长特性：贴壁细胞
培养基：IMDM+20%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
细胞常规培养传代流程( 请严格遵照无菌操作)
1. 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在 1-2min)
2. 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。
3. 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4. 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液(每周 2-3 次)，待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。
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Ser294的磷酸化对PI4KIIIβ功能有什么作用？
磷酸化位点的突变使得PI4KIIIβ的脂激酶活性降低了60%。另外，与激酶失活的PKD突变体的显性失活效应相统一的，过量表达激酶死亡PKD1降低了PI4KIIIβ的脂激酶活性。
突变也降低了荧光标记的分泌型蛋白质从TGN到细胞表面的运输效率。PI4KIII的过量表达增加了标记蛋白到达细胞表面的数量。
总结起来，这些结果表明蛋白激酶和脂激酶对于分泌型蛋白运输过程都非常重要。
科研人员认为，PKD在TGN的功能就像是“瓶颈”一样进行调控：通过促使参与载体囊泡形成的蛋白质磷酸化，来控制分泌型分子的运输。
PI4KIIIβ是这些底物中的一员，通过PKD介导的磷酸化增强了它的脂激酶活性。这个过程进而增加了TGN膜中的PI(4)P数量。
因为PI(4)P数量和膜结合的ADP-核糖基化因子，被认为是介导载体囊泡形成的重要成员。接下来，对于研究者们的挑战将会是阐明载体囊泡形成的精确机制。
