细胞：SK-N-BE(2)细胞
中文名称：人神经母细胞瘤细胞
生长特性：贴壁细胞
培养基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
细胞常规培养传代流程( 请严格遵照无菌操作)
1. 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在 1-2min)
2. 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。
3. 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4. 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液(每周 2-3 次)，待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。
(网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；)
甲胎蛋白对HeLa细胞增殖的促进作用
为探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)对肿瘤细胞增殖的促进作用.
用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞, 通过MTT计数、 [3H]-TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖,
并用放射免疫法测定细胞内cAMP、共聚焦显微镜扫描细胞内Ca2+浓度等观察细胞内第二信使物质的改变及测定32P转移反映细胞内蛋白激酶A(PKA)活性；
用western 印迹分析法分析突变型p53、 p21ras蛋白表达. 结果显示AFP(浓度大于10 mg/L)对HeLa细胞增殖有明显的促进作用.
在AFP(20 mg/L)作用下, HeLa细胞cAMP浓度升高300%; Ca2+浓度最大升高154.9%、 PKA活性最大升高100%. 突变型p53和p21ras 分别增高81.1%(24 h)和96.2%(24 h).
抗甲胎蛋白单克隆抗体能有效地阻断AFP促HeLa细胞增殖作用.
以上表明,
(1)AFP具促HeLa细胞增殖的生理功能；
(2)AFP促进HeLa细胞增殖的作用是通过影响细胞内cAMP和Ca2+浓度以及PKA活性进而促进一些原癌基因的表达来实现的.
