细胞：KYSE-30细胞
中文名称：人食管磷癌细胞
生长特性：贴壁细胞
培养基：1640 培养基 血清：10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
细胞常规培养传代流程( 请严格遵照无菌操作)
1. 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在 1-2min)
2. 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。
3. 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。
4. 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液(每周 2-3 次)，待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。
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分离出具生殖潜能干细胞
在母体中发育了50天的猪胎儿皮肤组织中分离出一些干细胞，这些干细胞具有某种分化成具有卵母细胞特性的细胞的内在机制。
用诱导分化的条件培养基培养这些干细胞时，发现其中的一个亚群可以表达一些只有sheng殖细胞才能特异表达的基因和蛋白。
根据形态学观察，发现所培养的细胞从诱导分化的第10天开始，形成了克隆样结构，其中的一些克隆样结构逐渐从培养皿上脱壁，呈“囊泡状聚集体”悬浮于培养基中。在很多囊泡状聚集体中央有一个较大的细胞，这与同sheng殖有关的卵母细胞复合体结构非常相似。
如果将这些囊泡状聚集体放入供卵母细胞生长的培养基中，经过长时间的培养，囊泡状聚集体中的细胞亚群可以将位于中央部分的大细胞挤出；进一步培养这些“大细胞”，最终可以长成直径为80-100?滋m的细胞。
为了检测这些大细胞是否表达了具有卵母细胞代表性的标记分子，将这些大细胞挑出，分组提取RNA。
RT-PCR的检测结果表明，在这些“大细胞”以及作为阳性对照的卵巢组织中，均可以检测到所有卵母细胞特异表达的标记分子物。
