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上海邦景实业有限公司
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免疫组化（IHC）操作技巧总结
2022-3-29 阅读(1610)
免疫组化（IHC）操作技巧总结：
1. 把要做的切片先分好，做几个抗体可分几盒，不正常组织与正常组织要分开。其余做预实验用。
2. 选择实验要做的抗体时，要结合他们的正常组织和癌组织的分别表达率。
3. 试剂盒的选择可结合生物su强弱的情况。如：肝组织生物su含量高，S-P试剂盒生物su含量也高，故不能配合使用。
4. 每次开始做时，都必须先清点实验的必需品是否齐全。想好可能发生的意外，并先想好补救措施。当抗体不够用的情况下，原先买的抗体最好不要用完，留做可能需要的验证试验。新的抗体要尽量同公司，同批号。
5. 烤片（单一或综合）程度要适情况而定，可中途拿出甩一甩，尽可能先放在烤箱里烤3小时以上。切勿把片烤得太久了。程度刚好，脱蜡效果才会好。注意做好不同条件的切片标记。注意温度稳定，再烤片。
6. 二甲苯脱蜡。温度过低时，可先把二甲苯整罐放进烤箱加热，或者可把片放在二甲苯里一起加热脱蜡，这样效果会更好；若温度适宜，那还是在室温下脱蜡，要不可能会适得其反。时间也是适情况而定。
7. 高压修复时，要注意稀释比例，修复液的种类（EDTA不可以重新进行利用，可能发生交叉作用），PH值等。高压锅内压力未降至正常时不可打开，压力正常后可多放会儿，能更好的利用余压，把握程度。若是多次修复，每次都需先把锅内热水倒掉，换冷水，保证条件的可重复性。
8. 抗体反复冻融可使效价降低。抗体要防止污染。不可用塑料保存，塑料可吸附抗体。抗体稀释：应遵循“现用现配"的原则，对于PBS（其他稀释液，注意PH值，PBS为偏中碱性）稀释的抗体最好要当天使用。稀释比例恰好为佳，注意前带和后带效应。
9. 吹干封片时不能有泡泡。若是没封好，可进行二甲苯、酒精脱树胶，吹干再次封片，但镜下效果会明显变差。因而，若没必要，最好不要再次脱胶。DAB显色需用中性树胶封片，AEC（易溶于有机溶剂）需用水性胶封片。
10. 刚封完的载玻片会移动，故切片还没干时，尽量不要碰到盖玻片，可避免树胶溢出，片的整体效果不好。
