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PCR反应循环过程阐述
2023-10-23 阅读(141)
PCR( Polymerase Chain Reaction)-聚合酶链式反应,可以选择性扩增一段DNA序列。其基本步骤是,首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链,DNA样品中,特异性的引物能够与其互补的序列杂交,在dNTPs和Taq酶存在时,就可以合成模板DNA的互补链,反应完成后,将反应混合物加热使DNA双链变性,温度下降后,过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸-变性-退火-延伸的循环可以重复多次,使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。
1. 变性:加热使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链.
2. 退火:使溶液温度降至50~60℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合.
3. 延伸:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTPs),按5ˊ→3ˊ方向复制出互补DNA。
上述3步为一个循环,即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。从理论上讲,每经过一个循环,样本中的DNA量应该增加一倍,新形成的链又可成为新一轮循环的模板,经过25~30个循环后DNA可扩增106~109倍。