上海邦景实业有限公司

主营产品: 进口elisa试剂盒,细胞株,细胞系,菌种

8

联系电话

15000017673

您现在的位置: 首页> 技术文章 > 引起ELISA 检测灰区结果环节分析

ATCC细胞

elisa酶联免疫试剂盒

菌种

生化试剂

培养基

抗体

血清

标准品

PCR检测试剂盒

ELISA试剂盒

科研抗体

生化检测试剂盒

科研细胞

分子生物学试剂

PCR荧光定量检测试剂盒

检测试剂盒

PCR相关试剂

细胞培养

公司信息

人:
刘小姐
话:
021-52960952
机:
15000017673
售后电话:
15000017673
真:
021-57690166
址:
上海市闵行区碧泉路36弄银宵大厦
编:
200000
址:
www.bhsy-e.com/
铺:
http://www.gsrxyx.com/st582730/
给他留言

引起ELISA 检测灰区结果环节分析

2024-8-19  阅读(60)

  ELISA 测定的阳性判断值, 通常是将大量阴性和阳性人群的测定数据进行统计分析后确定的, 其确定依据为判断结果的假阳性和假阴性率低。在阳性判断值周围一定范围内之外的测定结果可归为可疑, 亦即ELISA 测定的“灰区”。“灰区”的大小可用统计学方法确定。测定结果处于“灰区”的样本, 可通过确认试验或追踪检测来确定到底是阳性还是阴性ELISA“灰区”是把定量分析的正常值范围引入定性分析而建立的概念。
 
  灰区的设置有二种: (1)CO × (1±C) , C 为该试剂的批内C (一般在15%~ 20% 间) ; (2)CO ±2S, S 为做室内ROC 的S。
 
  另外, 个人认为: ELISA“灰区”对于不同项目和应用的领域不同, 其设置不能一概而论。ELISA 质量保证是一个复杂的过程, 许多重要的环节都影响到检测的质量。现分析如下。
 
  1、方法学的影响
 
  ELISA 测定模式包括以下几种: 双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM 抗体捕捉法、竞争抑制法, 其中竞争抑制法因受操作时差所引起的bu 公平竞争等因素的影响, 结果重复性较差, 质量较难控制。
 
  2、试剂因素
 
  试剂的选择 检测的原理均基于抗原抗体反应。由于该反应过程受多种因素的影响, 如普遍存在基质效应、交叉反应等, 因而检测结果难以溯源, 不同方法、不同试剂之间甚至同一试剂不同批号间结果均缺乏可比性。试剂质量在很大程度上决定了检测的水平, 因此在引入新项目之前必须对试剂进行严格的评估。试剂的评估有以下几个步骤:
 
  1、 确定开展该项目的必要性;
 
  2、了解该项目现有的检测方法和原理;
 
  3、 在了解试剂的组成基础上选择多家试剂盒进行比较,判断标准先选参考方法或参考物质, 其次为临床的满意度及权wei机构的报告如各级室间质量评价、CDC 报告等;
 
  4、 定期对检测结果进行追踪反馈直至最终认可该试剂。
 
  3、样本因素
 
  标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素,前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体等, 后者包括标本溶血、标本被污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。其中外源性干扰因素是我们在检测过程中可以避免也是必须避免的因素, 而避免内源性因素的干扰则主要通过选择合适的试剂盒。在临床中遇到少见的疑难病例时应当考虑到内源性干扰因素的存在。以下对外源性干扰因素进行简要说明:
 
  标本溶血 要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团, 其具有类过氧化物的活性, 因此, 在以辣根过氧化物酶(ho rseradish peroxidase,HRP) 为标记酶的ELISA 测定中, 如果血清标本中血红蛋白浓度较高, 则其就很容易在温育过程中吸附于固相, 从而与后面加入的底物反应显色。
 
  4、操作因素对ELISA 结果的影响
 
  ELISA 测定一般遵循以下步骤: 固相包被→加样品→温育→洗涤→加酶结合物→温育→洗涤→加底物→温育→显色→终止显色→比色
 
  目前各种形式的ELISA 自动分析仪已经进入市场, 如广泛应用于血站系统的微板式全自动酶免分析仪, 其试剂为开放式的, 而对于其它类型的, 则试剂和仪器往往是配套的。但当前大部分医学实验室均采用手工操作加仪器测定的方式。
 
  ELISA 操作步骤复杂, 操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。加样器是一种比较精密的工具, 其在长时间使用时会因机械磨损或者推动杆内附着血痂等原因造成加样不准, 尤其是对于样本量较大的临床实验室, 因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加不同的标本时均需更换吸嘴, 以免发生交叉污染。加样时速度不可太快, 避免将标本加在孔壁上部, 并注意不要溅出或产生气泡。加样时还应当注意操作时差对结果的影响, 操作时差是指加入标本、试剂及混匀时间的差异。操作时差在每个实验中都存在, 尤其是手工操作, 日常检测标本多达几百个,从加入第一个标本到最后一个标本, 需几十分钟, 加入试剂及混匀等均存在着前后时间差异, 使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致, 操作时差对竞争法检测的结果影响更大, 在加酶结合物和底物时可用定量多道。
 


产品对比 二维码 在线交流

扫一扫访问手机商铺

对比框

在线留言