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防止PCR实验污染的方法

2025-3-11  阅读(59)

  进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,-大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。
 
  一、划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域内进行,PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行:
 
  l 试剂准备区。
 
  l 标本制备区。
 
  l PCR扩增区及分析区。
 
  切记:任何一间的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
 
  二、分装试剂:PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中,不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA:
 
  n PCR用水应为高压的双蒸水;
 
  n 引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制;
 
  引物和dNTP应分装储存,分装时应标明时间,以备发生污染时查找原因。
 


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