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上海邦景实业有限公司
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PCR反应体系内部因素
2025-5-6 阅读(15)
一个PCR反应过程分为很多的步骤，包括样本采集，运输，核酸提取，qpcr扩增等步骤，因此结果会受到很多因素的影响，本文将常见因素分为内部因素和外部因素，内部因素是指正常试剂体系中的成分，外部因素是指环境或者样本带入的因素。
体系内部因素:
1、引物：长度、扩增跨度、特异性等因素；
2、酶及其浓度：酶浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少；
3、dNTP的质量与浓度：dNTP溶液呈酸性，一般配置成体系需将其调节至7.0-7.5，正常情况下4种dNTP的浓度应该相等，如果其中某一种过高就会引起错配，浓度过低又会引起PCR产物的产量。不过目前使用的都是商品化配置好的预混液体系；
4、模板核酸：模板核酸的量和纯度，是PCR成败与否的关键环节之一，对于RNA模板更要注意RNA的降解；
5、Mg2+浓度：主要影响PCR扩增的特异性和产量，Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异性扩增，浓度过低会降低Taq 酶的活性，使反应产物减少；
6、温度与时间的设置：变性温度与时间、退火温度与时间、延伸温度与时间；
7、循环次数：循环次数决定PCR扩增程度，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般温度循环次数在30-40次之间，循环次数越多，非特异性产物的量就越多。
