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上海邦景实业有限公司
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ATCC细胞标本的稀释原则
2018-3-16 阅读(207)
ATCC细胞标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。zui后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
操作流程：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加标记抗体工作液 100μl(取1μl标记抗体加99μl标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同标记抗体工作液) 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
ATCC细胞HAMSC 人羊膜间充质基质细胞 5 x 10^5 cells/vial
HCMSC 人绒毛膜间充质基质细胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-bm 人骨髓间充质干细胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-ad 人脂肪间充质干细胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-hp 人肝脏间充质干细胞 5 x 10^5 cells/vial
HUMSC 人脐带间充质干细胞 5 x 10^5 cells/vial
HPMSC 人肺间充质干细胞 5 x 10^5 cells/vial
HVMSC 人脊柱间充质干细胞 5 x 10^5 cells/vial
HMMEC 人微血管内皮细胞 5 x 10^5 cells/vial
HMEpiC 人上皮细胞 5 x 10^5 cells/vial
HMF 人成纤维细胞 5 x 10^5 cells/vial
HUVEC 人脐静脉内皮细胞 5 x 10^5 cells/vial
HUAEC 人脐动脉内皮细胞 5 x 10^5 cells/vial
HUVSMC 人脐静脉平滑肌细胞 5 x 10^5 cells/vial
HUASMC 人脐动脉平滑肌细胞 5 x 10^5 cells/vial
RPC 大鼠垂体细胞 5 x 10^5 cells/vial
RMC 大鼠脑膜细胞 5 x 10^5 cells/vial
RN-r 大鼠脑脊神经元 1 x 10^6 cells/vial
RN-c 大鼠皮质神经元 1 x 10^6 cells/vial
RGC 大鼠颗粒细胞 1 x 10^6 cells/vial
RN-h 大鼠海马神经元 1 x 10^6 cells/vial
RN-sn 大鼠黑质神经元 1 x 10^6 cells/vial
RN-s 大鼠纹状体神经元 1 x 10^6 cells/vial
RN-vsc 大鼠腹脊髓神经元 1 x 10^6 cells/vial
RN-dsc 大鼠背脊髓神经元 1 x 10^6 cells/vial
ROPC 大鼠少突胶质前体细胞 5 x 10^5 cells/vial
RSC 大鼠雪旺细胞 5 x 10^5 cells/vial
RPNF 大鼠周神经成纤维细胞 5 x 10^5 cells/vial
RA 大鼠星形胶质细胞 5 x 10^5 cells/vial
RA-c 大鼠小脑星形胶质细胞 5 x 10^5 cells/vial
RA-h 大鼠海马趾星形胶质细胞 5 x 10^5 cells/vial
RM 大鼠小胶质细胞 5 x 10^5 cells/vial
RLF 大鼠淋巴成纤维细胞 5 x 10^5 cells/vialATCC细胞
