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上海邦景实业有限公司
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ATCC细胞实验时常遇到的问题分析
2018-3-21 阅读(397)
ATCC细胞实验时常遇到的问题分析
1 试剂空白
试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质；如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。碱性磷酸酶、r一谷氨酰转肽酶、等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应，在放置过程中其试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。原则上，吸光度上升的反应，其试剂空白吸光度越低越好，不能超过一个高限；相反，吸光度下降的反应，其试剂空白吸光度不能低于一个低限。因此，试剂空白吸光度限值，常作为程序参数输入仪器，如经核查超限，仪器会自动报警，提示更换试剂。需要指出的是，还原型辅酶I（或II）等投料量不足或劣质的原料，往往需要加大用量，才使“表观”吸光度上升，凑合过试剂空白核对的“关”，其后果为如下情况：
1．1 线性范围变窄 现象：高值测不高。原因：试剂时有效成分投料量不足；试剂成份稳定性较差。
1．2 灵敏度变低现象：酶促反应速度曲线斜率下降，测定结果有严重系统误差。原因：试剂底物浓度不足。
1．3 低值偏高 现象：试剂空白的变化曲线（吸光度VS时间）明显波动。原因：试剂自身不稳定，自行分解；工具酶纯度不够，杂酶含量超限，导致干扰作用。
2 样品信息
样品的溶血、脂血、黄疸等会对测定结果产生非化学反应的干扰。因此，应根据溶血、脂浊、黄疸的光谱吸收特性，采用双波长或多波长的检测模式，并在结果计算中扣除因溶血、脂血、黄疸引起的影响，减少干扰程度。
3 elisa试剂盒测定范围
每种待测物都有一个可测定的浓度或活性范围，样品结果若超过此范围，分析仪将显示结果超过范围的提示。表示试剂已经变质，应更换合格试剂。
4 底物耗尽
使用连续监测法、两点法测定酶活性时，若酶活性非常高，底物接近被耗尽，吸光度上升或下降会超过某一吸光度变化范围，监测期的吸光度将偏离线性，使测定结果不可靠。
5 酶的预活化
测定血清中的某些酶，如CK，离体（采血）后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巯基（一SH）被氧化造成的。只有通过适当的还原作用才能重新激活。如CK—NAC试剂盒即含有CK活化剂，名为N一乙酰半。实验研究证明，NAC对血清中已失活的CK活化过程约需180 S。这就是CK测定为什么要延迟时间较长的理论依据。在AST，ALT采用IFCC方法测定时需要磷酸吡哆醛预活化。需要强调：含有活化剂的生化试剂，其测定酶活性的结果要高些。
6 校准与结果溯源性
酶的校正：要满足在同一方法学、同一测定条件、与理论计算的FACTOR值差异不大，没有发现有明显影响因素，方可进行校正。
ATCC细胞HOPC-os cDNA 人少突胶质前体细胞(悬浮生长)cDNA 20 reactions
HSC cDNA 人雪旺细胞cDNA 20 reactions
HPC cDNA 人神经束膜细胞cDNA 20 reactions
HA cDNA 人星形胶质细胞cDNA 20 reactions
HA-c cDNA 人小脑星形胶质细胞cDNA 20 reactions
HA-sp cDNA 人脊髓星形胶质细胞cDNA 20 reactions
HA-h cDNA 人海马趾星形胶质细胞cDNA 20 reactions
HM cDNA 人小胶质细胞cDNA 20 reactions
HDMEC cDNA 人微血管内皮细胞cDNA 20 reactions
HDLEC cDNA 人血管平滑肌细胞cDNA 20 reactions
HEK cDNA 人表皮角质细胞cDNA 20 reactions
HEK-a cDNA 人表皮角质细胞-成人cDNA 20 reactions
HEM-l cDNA 人表皮黑色素细胞-浅色素cDNA 20 reactions
HEM-m cDNA 人表皮黑色素细胞-中色素cDNA 20 reactions
HEM-d cDNA 人表皮黑色素细胞-深色素cDNA 20 reactions
HDF-f cDNA 人成纤维细胞-胎儿cDNA 20 reactions
HDF-n cDNA 人成纤维细胞-新生儿cDNA 20 reactions
HDF-a cDNA 人成纤维细胞-成人cDNA 20 reactions
HHDPC cDNA 人细胞cDNA 20 reactions
HHGMC cDNA 人生发基质细胞cDNA 20 reactions
HHORSC cDNA 人外根壳细胞cDNA 20 reactions
HHIRSC cDNA 人内根壳细胞cDNA 20 reactions
HLEC cDNA 人淋巴内皮细胞cDNA 20 reactions
HLF cDNA 人淋巴成纤维细胞cDNA 20 reactions
HOK cDNA 人口腔角质细胞cDNA 20 reactions
HGF cDNA 人牙龈成纤维细胞cDNA 20 reactions
HPLF cDNA 人牙周膜成纤维细胞cDNA 20 reactions
HEEpiC cDNA 人食道上皮细胞cDNA 20 reactions
HESMC cDNA 人食道平滑肌细胞cDNA 20 reactions
HIMEC cDNA 人肠微血管内皮细胞cDNA 20 reactions
HISMC cDNA 人肠平滑肌细胞cDNA 20 reactionsATCC细胞
