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上海邦景实业有限公司
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如何处理上皮细胞株培养中遇到的问题
2018-10-18 阅读(335)
如何处理上皮细胞株培养中遇到的问题
准备一烧杯37°C的水。从液氮储存中取出一管细胞，注意保护手和眼睛。拧松管盖1/4圈，等待10秒钟以释放螺纹中可能残留的液氮，再重新拧紧管盖。将冻存管的下半部分置于37°C水浴中进行解冻，直至冻存管内仅剩余一小块冰芯，使细胞迅速解冻。
用消毒液擦拭管体外表面，再将其移至II级A型层流细胞培养通风橱中。打开管盖，使用1 mL移液器上下吹打细胞悬液以分散细胞。从管中吸取20 uL细胞悬液，并将其稀释于20 uL台盼蓝溶液中（如：Gibco™台盼蓝，货号 15250-061）。
使用血细胞计数板来确定每毫升悬液中的活细胞数。将管中悬液（1 mL）稀释至产品说明中的浓度（例如1.25 x 10E4活细胞/毫升，Gibco™ 新生人表皮角质形成细胞）。将5 mL细胞悬液加入25 cm2培养瓶，或将15 mL细胞悬浮液加入75cm2培养瓶中。摇匀培养瓶中的培养基以*分散细胞。许多类型的细胞都会迅速贴壁，如果没有在传代后即刻摇匀细胞，细胞可能生长不均匀。在37°C、5% CO2/95%空气、湿度细胞培养箱中培养细胞。为获得理想的结果，培养开始后至少在24小时之内不要扰动细胞。
是否需要在种板前离心细胞以去除冻存培养基？
我们不在种板前离心细胞以去除冻存培养基。尤其是在不适当的高速条件下，离心对细胞有损伤。以我们Invitrogen™细胞培养实验室目前经验的来看，如果DMSO的浓度足够低，不会对细胞造成伤害。因此，我们的产品说明中提供了一份详细方案，其中包括如何使用的接种密度和培养基的体积稀释细胞使得DMSO的终浓度低于0.4%（v/v）。
为何我的原代细胞生长变慢或停止生长？
原代细胞未经永生化处理，因此群体倍增次数有限。每一种细胞类型都拥有不同的大群体倍增次数，这一参数可在产品批次的COA（certificate of analysis）上找到。
为何我的原代细胞复苏后存活率如此之低？
收货后立即将细胞保存于气相液氮中很重要。这些冻存管并不能确保不发生渗漏，将它们浸入液氮的液相中可能会使液氮渗入管中，进而影响细胞活力。
为何我的细胞无法依附于培养板/培养瓶表面？
从冰箱中取出血清并在2–8°C条件下过夜融化。随后可在室温下完成解冻过程。在这一过程中，血清应规则地进行混匀。
不要将FBS置于37°C条件下孵育过长时间，否则产品可能会变混浊。由于血清中许多成份存在敏感性，其性能也可能受到影响。产品一旦解冻，建议您立即使用。
