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关于人源细胞系如何培养及其他
2019-4-9 阅读(750)
关于人源细胞系如何培养及其他:
1 贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(不能超过20%),或可根据该细胞生长特性生长密度,考虑消化后,转移到新的培养瓶继续培养
2 如果人源细胞系为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时实验室技术人员会跟进解决
3 生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
人源细胞系常规培养传代流程
(1)吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在1-2min)
(2)注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
(3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的*培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
(4)镜下观察消化情况,在HS505.T人淋巴结成纤维样细胞生长特性边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉,加6-8ml*培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散。