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上海邦景实业有限公司
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细胞传代、复苏、冻存操作步骤
2020-7-20 阅读(7044)
今天文章分享细胞培养方法：
一、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
1.弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
2.加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
3.1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
4.将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
5.用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
6.悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
二、细胞复苏：
1.将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
2.在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
三、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
1.弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
2.1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
3.将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
4.将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
