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上海邦景实业有限公司
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禽流感荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素技术
2021-2-4 阅读(184)
禽流感荧光定量PCR检测试剂盒技术参数：
1. 符合行业标准SN/T 1686-2005《新城疫病毒中强毒株检测方法：荧光RT-PCR法》的检测要求，可用于禽肉、禽类组织脏器、禽类排泄和分泌物，及其泄殖腔和咽喉拭样中新城疫病毒的检测。
2. 灵敏度：对于接种的鸡胚尿囊液，检测的zui高稀释度可达10-8～10-7，与鸡胚病毒分离方法的灵敏度接近。定量检测线性范围可达10-1010拷贝/ml。
3. 特异性：采用基因序列数据库设计，并通过系统验证，新城疫病毒RT-PCR能够检测所有已知新城疫病毒毒株。对于其它禽类感染因子，本试剂盒检测结果为阴性。
4. 产品盒组成：（不包括新城疫病毒RNA提取试剂,用户可采用通用型病毒RNA提取试剂盒或试剂盒的提取方法。） 组成成份（48T/kit） 规格 数量 RNA提取液 30ml 1瓶 DEPC水 5 ml 1瓶 新城疫病毒RT-PCR一步法反应液 920ul 1管 逆转录酶（5U/ul） 48ul 1管 Taq HS酶（5U/ul） 24ul 1管 新城疫病毒阳性对照 100ul 1管 新城疫病毒阴性对照 100ul 1管 使用说明书 一份。
禽流感荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基，特别是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
